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目的:卵巢癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一,是女性生殖系统肿瘤中死亡率最高的肿瘤。大多数患者就诊时已是晚期,51%的患者为FIGO III期、29%的患者为FIGO IV期,而Ⅲ、Ⅳ期患者5年生存率仅为27%。肿瘤转移是影响卵巢癌患者生存率的主要因素。肿瘤细胞生长依赖于肿瘤微环境。研究发现,肿瘤细胞可以募集包括间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)在内的细胞进入肿瘤微环境发挥作用。脂肪源性干细胞(adipose derived stem cell,ADSC)是间充质干细胞家族的重要成员,ADSC已被证明参与多种肿瘤细胞的恶性进程,例如乳腺癌、肺癌、骨肉瘤、胶质细胞瘤、前列腺癌等。有报道ADSC通过旁分泌方式影响Wnt信号通路增强结肠癌细胞的转移能力。因此,本研究提取人ADSC制备条件培养基(conditioned medium,CM)培养卵巢癌SK-OV-3细胞,模拟其在肿瘤微环境中的作用,观察并研究肿瘤特性变化,探索ADSC在卵巢癌发展中的作用及其潜在机制,为卵巢癌的治疗提供新方向。研究方法:1.ADSC的分离、培养及鉴定。(1)运用胶原酶消化法提取网膜脂肪组织来源干细胞,分离并培养;(2)应用流式细胞仪鉴定原代细胞表面标志物,以及体外成脂、成骨诱导分化鉴定;(3)制备ADSC条件培养基(conditioned meidun,CM),设置无血清的DMEM/F12培养基作为对照组。2.研究ADSC对卵巢癌SK-OV-3细胞增殖、凋亡的影响,(1)通过CCK-8实验检测细胞增殖;(2)PI染色法检测细胞周期;(3)Annexin-V/PI荧光双染法检测细胞凋亡;(4)通过Western Blot检测凋亡相关蛋白表达情况。3.研究ADSC对卵巢癌SK-OV-3细胞迁移、侵袭的影响,(1)通过划痕实验、Transwell迁移实验检测细胞迁移;(2)Transwell侵袭实验检测细胞侵袭;(3)应用RT-PCR、Western Blot分别检测EMT相关指标在mRNA及蛋白水平表达情况。4.初步探讨ADSC对卵巢癌SK-OV-3细胞发挥作用的潜在机制,(1)通过Western Blot检测SALL4、Wnt/β-catenin信号通路及其下游靶基因的表达;(2)使用siRNA沉默经ADSC-CM处理的SK-OV-3细胞中SALL4的表达;(3)沉默SALL4、应用Wnt/β-catenin信号通路抑制剂XAV-939重新检测SK-OV-3细胞生物学行为;(4)采用免疫荧光双标实验探讨SALL4与β-catenin之间的关系。结果:1.原代ADSC呈细长梭形的成纤维样细胞生长形态;阳性表达CD105、CD73和CD90(≥95%阳性),阴性表达CD45、CD34、CD11b、CD19和HLA-DR(≤2%阳性);具有成脂、成骨分化能力。2.经ADSC-CM处理的SK-OV-3细胞,S和G2-M期细胞数量明显增加;凋亡率降低;凋亡抑制蛋白Bcl2表达上调,而凋亡促进蛋白Bax表达下调。3.经ADSC-CM处理的SK-OV-3细胞迁移侵袭特性增强;上皮标志物E-cadherin表达下调,间质标志物vimentin、N-cadherin表达上调。4.沉默SALL4和应用Wnt/β-catenin信号通路抑制剂XAV-939后,SK-OV-3细胞生物学行为均受抑制;SALL4和β-catenin共定位于细胞核和细胞质。结论:1.通过胶原酶消化法成功从人网膜脂肪组织中提取ADSC。2.ADSC通过激活SALL4介导的Wnt/β-catenin信号通路促进卵巢癌进展。