【摘 要】
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背景及目的:肝细胞癌（HCC）是原发性肝癌的主要类型,在全球癌症死亡率中居第二位。在HCC患者中,男女比例平均为2:1到4:1。睾丸特异性蛋白1（TSPY1）主要在成熟精原细胞中表达,此外,TSPY1在HCC中被异位激活。雄激素受体（AR）通过增强细胞氧化应激和DNA损伤、抑制p53介导的DNA损伤/修复系统和细胞凋亡来促进肝癌的发生。本研究通过检测TSPY1和AR的表达水平和验证两者之间的相互作
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背景及目的:肝细胞癌（HCC）是原发性肝癌的主要类型,在全球癌症死亡率中居第二位。在HCC患者中,男女比例平均为2:1到4:1。睾丸特异性蛋白1（TSPY1）主要在成熟精原细胞中表达,此外,TSPY1在HCC中被异位激活。雄激素受体（AR）通过增强细胞氧化应激和DNA损伤、抑制p53介导的DNA损伤/修复系统和细胞凋亡来促进肝癌的发生。本研究通过检测TSPY1和AR的表达水平和验证两者之间的相互作用及其机制,探讨TSPY1是否通过调控AR的表达促进肝癌的发生发展。方法:在本次研究中,通过免疫组化检测30例男性肝癌组织标本及配对的癌旁组织标本中的TSPY1和AR的蛋白表达水平;采取内源性共定位分析（在未经处理的MHCC-97H肝癌细胞、HCCLM3肝癌细胞以及男性肝癌组织中进行）,分别用不同种属的抗体进行免疫荧光共定位实验,TSPY1绿光标记,AR红光标记,然后在激光共聚焦显微镜下观察TSPY1和AR在细胞中的定位情况并进行扫描拍照,呈现黄色的位置则表示TSPY1和AR在该位置存在共定位;在肝癌细胞MHCC-97H和HCCLM3中采用免疫共沉淀以及Western blot技术验证TSPY1与AR之间的相互作用;构建过表达TSPY1慢病毒载体,通过慢病毒载体感染技术构建过表达TSPY1的Huh7细胞稳转株（Huh7-TSPY1组）,以空转染病毒载体的Huh7细胞作为对照（Huh7-GFP组）。感染72小时后,在荧光显微镜下观察感染效率。使用TRIzol一步法提取细胞总RNA,RT-qPCR检测TSPY1的基因表达水平;提取细胞总蛋白,使用Western blot检测TSPY1、AR蛋白表达水平以及WNT信号通路相关信号分子（β-catenin,GSK3β）的表达以及磷酸化水平。最后使用SPSS 17.0软件进行数据分析,计量资料以均值±标准差（x±s）表示,首先对数据进行正态性检验和方差齐性分析,当数据满足正态性分布和方差齐时,两样本均数比较采用独立样本t检验,方差不齐时,则采用校正t检验;当数据不呈正态性分布时,则采用秩和检验对两样本进行均数的比较。P<0.05,表示差异具有统计学意义。结果:1.TSPY1在肝癌组织与癌旁组织中的平均光密度值分别为0.043±0.018和0.003±0.001,两组相比,差异具有统计学意义（P<0.05）;AR在肝癌组织与癌旁组织中的平均光密度值分别为0.031±0.027和0.004±0.003,两组相比,差异具有统计学意义（P<0.05）。与癌旁组相比,肝癌组中TSPY1和AR的蛋白表达量均升高。2.TSPY1在细胞质和细胞核均有表达,并呈弥散分布;AR在细胞质和细胞核均有表达,并呈弥散分布;TSPY1与AR在细胞核中存在明显的共定位。3.在肝癌细胞MHCC-97H和HCCLM3的总蛋白中,能检测到AR抗体沉淀的免疫复合物中含有TSPY1蛋白。4.过表达TSPY1的Huh7细胞中,AR、β-catenin的蛋白水平均升高以及GSK3β的磷酸化表达升高。结论:1、TSPY1和AR在男性肝癌中可能存在相关性。2、TSPY1和AR之间存在相互作用关系。3、TSPY1可能通过活化Wnt/β-catenin信号通路调控AR的表达。
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