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菊苣(Cichorium intybus L.)是一种宝贵的药食同源植物,在保健食品、医药及天然饲料添加剂等领域有较高的利用价值和研究开发前景。近年来,菊苣还未被充分开发,我国新疆拥有开展菊苣种植及深加工得天独厚的优势,前景广阔。本实验以菊苣为实验材料,通过单因素结合正交试验研究了从菊苣根中提取纯化菊苣多糖(CP)的工艺条件,并分别研究菊苣多糖对正常及环磷酰胺(Cy)致免疫抑制小鼠的免疫调节作用,为菊苣的进一步研究奠定基础,从而促进菊苣的深入开发及有效利用。主要内容如下:
(1)采用紫外-可见分光光度(UV)法测定含量,菊苣总糖用苯酚-硫酸法在492.5nm处测定,菊苣还原糖用3,5-二硝基水杨酸(DNS)显色法在475.5nm处测定,再以两者的差值计算得到菊苣多糖含量。两套方法均简便易行,精密度、重复性好,准确度高。
(2)单因素试验对菊苣多糖的提取工艺参数进行考察,正交试验法确定了提取菊苣多糖的最佳工艺为:采用水提法,蒸馏水用量为菊苣根的5倍,90℃提取2次,每次1h。在此工艺下,能从每100g菊苣根中提取得到18.93g菊苣粗多糖。
(3)单因素试验研究了浓缩体积、氯仿-正丁醇体积比、多糖液与Sevag试剂体积比、脱蛋白次数对蛋白去除效果的影响,正交试验确定Sevag法除蛋白最佳工艺:菊苣多糖提取液浓缩到原体积1/8,氯仿:正丁醇(v/v)4:1,多糖浓缩液:Sevag试剂(v/v)3:1,脱蛋白3次。在此工艺下,多糖损失率为9.36%,蛋白质清除率达49.41%。
(4)设空白对照组、阳性对照香菇多糖(LNT)组15mg/kg、菊苣多糖低75mg/kg、中150mg/kg、高300mg/kg五组,研究菊苣多糖对正常小鼠免疫调节作用。与空白组相比,菊苣多糖中、高剂量组能显著提高正常小鼠脾脏指数(P<0.01);中剂量还可提高正常小鼠胸腺指数及吞噬指数(P<0.05)。同时,以环磷酰胺(Cy)建立小鼠免疫抑制模型,设正常对照组、模型组80mg/kg、LNT组15mg/kg、盐酸左旋咪唑(LMS)组22.5mg/kg、菊苣多糖低75mg/kg、中150mg/kg、高300mg/kg七组,研究菊苣多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节作用。结果显示,正常组脾脏、胸腺指数及吞噬指数均比模型组高(P<0.01),说明造模成功;与模型组相比,阳性对照LNT及LMS组、菊苣多糖低、中、高剂量组分别使免疫抑制小鼠的脾脏指数增长了48.61%、68.42%、59.17%、77.98%、77.23%(P<0.01);胸腺指数增长了23.06%(P<0.05)、16.53%、15.45%、31.18%(P<0.01)、24.58%(P<0.05);吞噬指数增长了10.27%、5.02%、8.12%、10.36%(P<0.05)、20.99%(P<0.01)。结果表明菊苣多糖具有一定的调节机体免疫力的作用。
(1)采用紫外-可见分光光度(UV)法测定含量,菊苣总糖用苯酚-硫酸法在492.5nm处测定,菊苣还原糖用3,5-二硝基水杨酸(DNS)显色法在475.5nm处测定,再以两者的差值计算得到菊苣多糖含量。两套方法均简便易行,精密度、重复性好,准确度高。
(2)单因素试验对菊苣多糖的提取工艺参数进行考察,正交试验法确定了提取菊苣多糖的最佳工艺为:采用水提法,蒸馏水用量为菊苣根的5倍,90℃提取2次,每次1h。在此工艺下,能从每100g菊苣根中提取得到18.93g菊苣粗多糖。
(3)单因素试验研究了浓缩体积、氯仿-正丁醇体积比、多糖液与Sevag试剂体积比、脱蛋白次数对蛋白去除效果的影响,正交试验确定Sevag法除蛋白最佳工艺:菊苣多糖提取液浓缩到原体积1/8,氯仿:正丁醇(v/v)4:1,多糖浓缩液:Sevag试剂(v/v)3:1,脱蛋白3次。在此工艺下,多糖损失率为9.36%,蛋白质清除率达49.41%。
(4)设空白对照组、阳性对照香菇多糖(LNT)组15mg/kg、菊苣多糖低75mg/kg、中150mg/kg、高300mg/kg五组,研究菊苣多糖对正常小鼠免疫调节作用。与空白组相比,菊苣多糖中、高剂量组能显著提高正常小鼠脾脏指数(P<0.01);中剂量还可提高正常小鼠胸腺指数及吞噬指数(P<0.05)。同时,以环磷酰胺(Cy)建立小鼠免疫抑制模型,设正常对照组、模型组80mg/kg、LNT组15mg/kg、盐酸左旋咪唑(LMS)组22.5mg/kg、菊苣多糖低75mg/kg、中150mg/kg、高300mg/kg七组,研究菊苣多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节作用。结果显示,正常组脾脏、胸腺指数及吞噬指数均比模型组高(P<0.01),说明造模成功;与模型组相比,阳性对照LNT及LMS组、菊苣多糖低、中、高剂量组分别使免疫抑制小鼠的脾脏指数增长了48.61%、68.42%、59.17%、77.98%、77.23%(P<0.01);胸腺指数增长了23.06%(P<0.05)、16.53%、15.45%、31.18%(P<0.01)、24.58%(P<0.05);吞噬指数增长了10.27%、5.02%、8.12%、10.36%(P<0.05)、20.99%(P<0.01)。结果表明菊苣多糖具有一定的调节机体免疫力的作用。