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目的:观察蛭龙活血通瘀胶囊对大鼠脑缺血—再灌注损伤的保护作用,并进一步探讨其作用机制。
方法:将150只雄性成年SD大鼠(另30只备用)随机分为6组,即蛭龙活血通瘀胶囊高剂量组、蛭龙活血通瘀胶囊中剂量组、蛭龙活血通瘀胶囊低剂量组、步长脑心通胶囊对照组、脑缺血—再灌注模型组和假手术组,每组25只。采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血—再灌注模型,给药各组分别予蛭龙活血通瘀胶囊1.6g/kg/只、0.8g/kg/只、0.4g/kg/只,步长脑心通胶囊0.8g/kg/只,模型组和假手术组予生理盐水,灌胃10天,采用“5分法”进行神经症状评分,称重,处死,取材:(1)腹主动脉取血,检测血液流变学指标,采用ELISA法检测血清白细胞介素—6(IL—6)、肿瘤坏死因子—α(TNF—α)、内皮素(ET)、一氧化氮(NO)的含量;(2)脑组织常规石蜡包埋切片,苏木素,伊红(HE)染色,病理组织学观察,采用免疫组织化学法检测脑组织胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)蛋白表达;(3)右侧大脑组织匀浆,采用化学比色法检测脑组织过氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。
结果:(1)蛭龙活血通瘀胶囊对大鼠一般情况及神经症状的影响。实验期间,假手术组大鼠毛色光泽,行动敏捷,对周围变化反应灵敏,未出现神经功能损伤症状。模型组及低剂量组大鼠毛色逐渐失去光泽,状态萎靡,自主活动减少,出现明显神经功能损伤症状,如向瘫痪侧转圈、倾倒,甚至不能站立等。高剂量组、中剂量组及对照组大鼠经治疗后精神状态好转,毛色逐渐光泽,自主活动恢复加快,神经症状逐渐好转,仅对侧前肢不能完全伸展,少数向瘫痪侧转圈,无倾倒等症状。(2)蛭龙活血通瘀胶囊对大鼠神经体征评分、脑指数及脑含水量的影响。模型组大鼠神经体征评分、脑指数及脑含水量较假手术组明显升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,高剂量组、中剂量组及对照组大鼠神经体征评分均明显降低(P<0.05),低剂量组大鼠神经体征评分虽无显著性差异,但仍有不同程度的降低;与低剂量组比较,高剂量组、中剂量组、对照组大鼠神经体征评分均明显降低,有显著性差异(P<0.05);高剂量组、中剂量组、对照组大鼠神经体征评分组间两两比较,均无显著性差异(P>0.05)。给药各组大鼠脑指数及脑含水量均较模型组明显降低(P<0.05),以高剂量组最为显著(P<0.01);给药各组大鼠脑指数及脑含水量组间两两比较,均无显著性差异(P>0.05)。(3)蛭龙活血通瘀胶囊对大鼠炎症细胞因子的影响。与假手术组比较,模型组大鼠血清IL—6、TNF—α及ET含量明显升高,NO含量显著降低(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,给药各组IL—6、TNF—α含量均明显降低(P<0.05);给药各组大鼠IL—6、TNF—α含量组间两两比较,均无显著性差异(P>0.05)。与模型组比较,高剂量组、中剂量组及对照组大鼠血清ET含量明显降低、NO含量明显升高(P<0.05),低剂量组大鼠血清ET和NO含量虽无显著性差异,但仍分别有不同程度的降低和升高;与低剂量组比较,高剂量组、中剂量组、对照组ET含量均明显降低、NO含量均显著升高,有显著性差异(P<0.05);高剂量组、中剂量组、对照组大鼠ET和NO含量组间两两比较,均无显著性差异(P>0.05)。(4)蛭龙活血通瘀胶囊对大鼠血液流变学指标的影响。模型组大鼠全血高、低切粘度(BV)、血浆粘度(PV)和红细胞聚集指数(RE)显著高于假手术组(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,给药各组BV、PV和RE均显著降低(P<0.05或P<0.01),其中高剂量组降低全血高切粘度为最优(P<0.01);给药各组大鼠BV、PV和RE组间两两比较,均无显著性差异(P>0.05)。(5)蛭龙活血通瘀胶囊对大鼠脑组织GDNF蛋白表达的影响。模型组大鼠脑组织GDNF蛋白表达较假手术组明显升高(P<0.01);与模型组比较,高剂量组、中剂量组及对照组大鼠脑组织GDNF蛋白表达明显升高(P<0.05或P<0.01),低剂量组大鼠脑组织GDNF蛋白表达虽无显著性差异,但仍有不同程度的升高;与低剂量组比较,高剂量组、中剂量组、对照组大鼠脑组织GDNF蛋白表达均明显升高,有显著性差异(P<0.05或P<0.01);高剂量组、中剂量组、对照组大鼠脑组织GDNF蛋白表达组间两两比较,均无显著性差异(P>0.05)。(6)蛭龙活血通瘀胶囊对大鼠脑组织SOD活性和MDA含量的影响。与假手术组比较,模型组大鼠SOD活性均明显降低,MDA含量均明显升高,有显著性差异(P<0.05);与模型组比较,高剂量组、中剂量组及对照组大鼠SOD活性均明显升高,MDA含量均明显降低,有显著性差异(P<0.05),低剂量组大鼠SOD活性和MDA含量虽无显著性差异,但仍分别有不同程度的升高和降低;与低剂量组比较,高剂量组、中剂量组、对照组大鼠SOD活性均明显升高,MDA含量均明显降低,有显著性差异(P<0.05);高剂量组、中剂量组、对照组大鼠SOD活性和MDA含量组间两两比较,均无显著性差异(P>0.05)。
结论:(1)大脑中动脉“线栓法”可成功制造脑缺血—再灌注模型,用于脑缺血—再灌注研究。(2)蛭龙活血通瘀胶囊能明显改善大脑中动脉缺血—再灌注损伤大鼠神经症状,降低脑指数和脑水含量,减少缺血区神经元的死亡,发挥保护作用。其主要作用环节可能与抑制缺血—再灌注损伤的炎症反应,降低血清IL—6、TNF—α及ET的水平,升高NO含量,上调脑组织GDNF蛋白表达,改善微循环和提高脑组织中抗氧化酶,抑制自由基产生有关。(3)蛭龙活血通瘀胶囊对脑缺血—再灌注损伤大鼠具有明显的保护作用,且存在一定量效关系。