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目的:骨肉瘤是高度恶性骨肿瘤,多见于儿童和青少年,临床治疗非常困难。基于骨肉瘤特殊的发病位置和尚不清楚的发病机理,导致了骨肉瘤的生存率没有得到进一步的提高。已经有大量的学者对骨肉瘤生长的分子机制进行了深入研究,发现很多与其相关的基因,如SV40T抗原基因、p53基因、c-Fos基因、Rb基因、p62基因及其通路。B7-H3是由Chapoval等人发现的B7协同共刺激分子(costimulatory molecule)家族成员之一。大量的研究发现,B7-H3的表达与许多肿瘤有密切的关系,也有研究发现B7-H3可以介导细胞与细胞之间以及细胞与细胞外基质蛋白之间的粘附,B7-H3的粘附功能的发现为解释该分子在肿瘤侵袭、转移中的作用提供了新的线索。方法:本实验一共分三部分:(1)利用B7-H3过表达载体转染小鼠的骨肉瘤细胞K7M2-WT,得到稳定过表达B7-H3的小鼠骨肉瘤细胞K7M2-WT(B7-H3),并通过实时定量PCR(real-time PCR)、逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)及流式细胞技术(flow cytometry,FCM)对该转染细胞进行鉴定。(2)对转染和未转染的小鼠骨肉瘤细胞依次进行了细胞粘附能力测试,细胞增殖能力测试,细胞水平迁移能力测试,细胞侵袭能力测试和细胞抗凋亡能力检测。同时,通过检测两种细胞的ALP含量,研究是否存在B7-H3对其成骨分化能力造成影响的可能。(3)建立B7-H3过量表达的骨肉瘤动物模型,并通过这个模型对生长4周的骨肉瘤瘤体进行形态学、组织学及蛋白质印迹(western blot)的研究。结果:(1)转染后的小鼠骨肉瘤细胞通过实时定量PCR、逆转录PCR及流式细胞技术的鉴定,从mRNA和蛋白质水平上均发现B7-H3的表达量显著高于未转染组的小鼠骨肉瘤细胞K7M2-WT。(2)通过比较K7M2-WT(B7-H3)和K7M2-WT的两组细胞的相关实验结果,发现稳定过表达B7-H3的小鼠的骨肉瘤细胞K7M2-WT(B7-H3)在细胞粘附、细胞增殖、细胞水平迁移、细胞侵袭及细胞抗凋亡的能力都强于未转染B7-H3的小鼠骨肉瘤细胞K7M2-WT。同时,通过ALP检测,发现B7-H3并没有对其成骨分化能力造成影响。(3)通过建立的动物模型,发现转染的K7M2-WT(B7-H3)组的肿瘤明显大于K7M2-WT组。同时还发现B7-H3在体内微环境下持续高表达。结论:成功构建了能过量表达B7-H3的小鼠骨肉瘤细胞K7M2-WT(B7-H3)。B7-H3分子的过表达提高了骨肉瘤细胞的粘附能力、增殖能力、迁移能力、侵袭能力以及抗凋亡的能力,但不能改变其成骨分化的能力。在体内,转染的细胞也能高表达B7-H3,优于正常组织的B7-H3表达。这意味着B7-H3可能具有抑制骨肉瘤免疫,促进肿瘤发生的作用。