脐带血单个核细胞体外诱导成CIK细胞及其抗肿瘤效应的实验研究

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目的:探索建立CIK细胞的有效原代培养方法并阐明其生物学特性,为该细胞在肿瘤过继免役治疗中的运用奠定基础。方法:无菌采集健康足月产胎儿脐带静脉血,以淋巴细胞密度梯度离心法提取其中的单个核细胞,通过定时及选择加入IFN-γ、IL-2、IL-1、OKT3等细胞因子使其定向诱导成CIK细胞或LAK细胞,并设未加细胞因子的脐带血单个核细胞(CBMNCs)培养作为空白对照;于培养过程中的不同时间测定各组细胞的细胞表型;利用改良的MTT法于细胞增殖高峰期测定各组效应细胞对白血病细胞株K562、宫颈癌细胞株Hela及肺癌细胞株YTMLC的细胞毒活性;利用流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡及细胞周期的分布拟阐明CIK细胞的杀瘤机制。结果:实验发现,通过四种细胞因子的联合加入,可大量诱导出高活性的CIK细胞:CIK细胞在培养的第4-5天开始增殖,第12天达高峰,增殖的细胞表型以CD3+CD56+细胞为主,其相对百分比由最初的0.14%增加到了22%,共增加了163倍,绝对数增加约1300倍,CD3+、CD4+、CD8+等细胞亦出现不同程度的增殖;而LAK细胞的增殖高峰出现在第8天,随后增殖不明显,其相对百分比增加仅为64倍;空白对照组细胞各表型无明显变化,亦无细胞的增殖。体外细胞毒实验显示:针对K562、Hela及YTMLC肿瘤细胞,CIK细胞的体外杀伤活性高于LAK细胞及脐带血单个核细胞,各组间存在显著性差异,且其细胞毒活性随效靶浓度比的增大而相应增加。流式细胞仪检测结果表明:CIK细胞可诱导三株靶细胞出现明显的凋亡小峰。结论:1.脐带血可作为诱导CIK细胞的重要组织来源 2.体外四种细胞因子的联合运用能成功地诱导出大量的CIK细胞,其增殖高峰位于培养的第12天左右,适宜在此期进行临床输注 3.诱导凋亡为CIK细胞杀伤肿瘤细胞的作用机制之一 4.在本实验研究的浓度范围内:CIK细胞较传统的LAK细胞具有更高的体外杀瘤活性,合理利用该细胞将为肿瘤生物免役治疗注入新的希望。
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