蝉拟青霉杀虫作用的研究

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蝉拟青霉既是名贵中药,又有较高的致病性。使用蝉拟青霉做材料研究它在生物防治上的开发价值,具有深远的意义。本文研究蝉拟青霉对蚕豆蚜虫和小菜蛾的杀虫作用。得出8株蝉拟青霉都具有不同程度的杀虫作用,其中GZDXIFR4611的杀虫效果最好。孢子悬液的最高致死率可达到88.7%。影响昆虫病原真菌毒力有酶的因素,本研究主要从酶的方面研究它的杀虫作用。所以对蝉拟青霉蛋白酶、几丁质酶、溶菌酶和酯酶的酶活力研究,在8种菌株中,GZDXIFR4611酯酶的活性明显比其它三种酶的活力高,初步得到蝉拟青霉酯酶与毒力有一定的相关性。为了更好的研究蝉拟青霉酯酶与杀虫作用的关系,优化产酯酶的条件,从而提高其产率。再进行分离纯化,对分离物质进行杀虫实验。筛选蝉拟青霉酯酶的最佳液体培养基:可溶性淀粉10g/L,酵母膏7.5g/L,K2HPO4 0.35g/L,MgSO4.7H2O0.35g/L。GZDXIFR4611在48小时产酯酶最多,酶的最适反应温度为40℃,最适pH为6.5,最适反应时间为40min,在25℃条件下,蝉拟青酶酯酶的半衰期约是58h,蝉拟青霉酯酶在40℃时稳定性最高。粗酶液经硫酸铵分级盐析,取40—70%硫酸铵饱和度下的蛋白质沉淀溶解,用Sephadex G-50柱层析脱盐,收集高活性管;使用Sephadex G-100对酶液进行分离纯化,也收集高活性管。我们得出酯酶收率是20.4%,纯化倍数是8.05。把分离纯化的每个阶段得到的酶液进行杀虫实验,得出通过Sephadex G-100过柱收集管的毒力效果最好,致死率可达到86.7%,说明蝉拟青霉酯酶有很大的毒力作用。研究了8株蝉拟青霉胞内几丁质酶、蛋白酶、溶菌酶活力,从中筛选出酶活力高的菌株(GZDXIFR3716);并对3种酶的产酶条件进行了研究。结果表明,GZDXIFR3716几丁质酶、蛋白酶和溶菌酶含量最高的发酵时间分别为48h、60h和84h;3种酶的最适反应温度分别为50℃、40℃和40℃;3种酶的最适反应pH分别为6.0、7.0和5.0。
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