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目的：研究间变性大细胞淋巴瘤(Anaplastic Large Cell Lymphoma，ALCL)中间变性淋巴瘤激酶(hnaplastic lymphoma kinase，ALK)蛋白、ALK mRNA和ALK相关融合基因的表达和相互间的关系及其临床病理意义，并探讨clusterin对间变性大细胞淋巴瘤的诊断价值。
方法：收集47例ALCL和对照组淋巴瘤即周围T细胞淋巴瘤非特殊型(Peripheral T-cell lymphoma，unspecified，PTCL-u)22例、经典型霍奇金淋巴瘤(Classical Hodgkin lymphoma，CHL)21例，所有病例均为福尔马林固定、石蜡包埋组织。镜下形态学观察；用免疫组织化学Envision二步法观察CD3、CD15、CD30、ALK及clusterin的表达特征；采用逆转录聚合酶链反应(Reverse-translation PCR，RT-PCR)检测45例ALCL和所有对照组淋巴瘤石蜡包埋组织中ALK mRNA及ALK相关7种常见融合基因的表达，以看家基因PGK作为内对照检测RNA质量和逆转录效果；扩增产物进行DNA测序并分析ALK mRNA和ALK相关融合基因的序列特征；选其中33例ALCL，应用荧光原位杂交方法(Fluorescence in situ hybridization，FISH)检测ALK相关融合基因，并与RT-PCR检测结果作比较分析。
结果：(1)ALCL的临床病理学特征：ALCL中男性28例，女性19例。原发结内44例(94％)，结外3例(6％)，分别为颅骨、右肘、腹部各1例。ALCL发病年龄3-71岁，中位年龄32岁；其中普通型45例，小细胞型和淋巴组织细胞型各1例。(2)免疫组织化学结果：ALCL中47例(100％)表达CD30；31例(66％)表达CD3；无病例表达CD15；28例(60％)表达ALK，其中22例胞核及胞质阳性，6例仅胞质阳性；38例(81％)表达clusterin，阳性定位于胞质和(或)核旁高尔基体区。25例(89％)ALK阳性和13例(68％)ALK阴性的ALCL病例表达clusterin。ALK阳性者中位年龄20岁(3～70岁)，阴性者中位年龄48岁(4～71岁)，阳性者发病年龄显著小于阴性者(P<0.01)，ALK阳性与否与发生部位，性别无关(P>0.05)。clusterin阳性中位年龄30岁(3～71岁)，阴性中位年龄34岁(4～69岁)，clusterin的表达与否与年龄、部位和性别均无关(P>0.05)。对照组PTCL-u中22例(100％)表达CD3；6例(27％)表达clusterin；无病例表达CD30、CDl5和ALK。对照组CHL中10例(48％)表达CD30；21例(100％)表达CDl5；3例(14％)表达clusterin；无病例表达CD3和ALK；clusterin在ALK阳性及阴性的ALCL中的表达均显著高于PTCL-u和CHL的表达(P<0.05)。(3)RT-PCR检测结果：45例ALcL中PGK阳性检出率为100％，3l例(69％)有ALK mRNA表达，在这31例病例中25例(81％)检测到NPM-ALK融合基因，1例(3％)TPM3-ALK融合基因，1例(3％)TPM4-ALK融合基因。所有融合基因PCR产物经测序与Genebank进行比对证实。ALK的mRNA表达组发病年龄显著小于无表达组(P<0.01)，ALKmRNA表达病例在性别、原发部位方面差异无统计学意义(P>0.05)，ALK蛋白和ALKmRNA的表达密切相关(P<0.01)，并且，ALK蛋白和ALK mRNA的表达均与ALK融合基因表达密切相关(P<0.01)。另外4例ALK蛋白ALK mRNA均阳性者和14例ALK mRNA阴性者均未检测到7类中任何形式的融合基因(NPM-ALK，TFG-ALK，CLTC-ALK，ATIC-ALK，TPM3-ALK，TPM4-ALK，and MSN-ALK)。对照组PTCL-u和CHL均未检测到ALK mRNA和7类中任何形式的融合基因(4)FIsH检测结果：21例ALK蛋白、ALK mRNA及NPM-ALK融合基因均阳性的病例中，18例可检测出明显的荧光分离信号；4例ALK蛋白表达阴性，而ALK mRNA及NPM-ALK融合基因均有表达的病例中，2例可检测出明显的荧光分离信号；2例具有TPM3-ALK和TPM4-ALK融合基因的病例，均检测出明显的荧光分离信号；4例ALK蛋白和ALKmRNA有表达，而未检出何种融合基因病例中，2例可检测出明显的荧光分离信号(其中1例可见多对融合及一对分离荧光信号图像)；2例ALK蛋白、ALK mRNA及NPM-ALK融合基因均阴性性的病例中，检测出明显的2对荧光信号临近或融合成黄色信号。
结论：(1)ALCL是一类CD30阳性的T细胞淋巴瘤，是儿童和年轻人较多发的淋巴瘤类型之一，大多数ALCL瘤细胞呈高度异型性，多形性，可有窦内生长、细胞黏附、hallmark cell等特征性的形态学特点。(2)ALK蛋白在ALcL中有较高和特异的表达，是诊断和鉴别诊断ALcL较好的生物学指标。另外，ALK蛋白阳性者发病年龄显著小于阴性者，在临床病理诊断和预后判断中可能具有重要意义。(3)与对照组淋巴瘤相比，clusterin蛋白在ALK阳性和ALK阴性的ALCL中均有较高表达，可作为ALCL诊断和鉴别诊断的新的分子指标，特别在ALK阴性的ALcL与PTCL-u和CHL鉴别诊断时。另外，针对clusterin靶基因治疗方法有可能成为ALCL新型的临床治疗手段。(4)应用RT-PCR检测ALK mRNA及ALK相关融合基因能对ALK蛋白的检测进行有益的补充，ALK相关融合基因的检测可进一步证实ALK蛋白及mRNA异常的分子机制。这不仅可为临床病理提供分子遗传学诊断证据，而且对临床预后的预测具有重要价值。(5)FISH检测方法能直接、简便地观察到染色体易位，可与RT-PCR方法检测ALK相关融合基因互为补充，两者结合可提高病理诊断准确率。