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日本脑炎病毒(Japaneses encephalitis virus, JEV)又称乙型脑炎病毒,为黄病毒科单股正链RNA病毒,基因组约为11 kb,仅有一个开放阅读框(open reading frame, ORF ),从5’到3’端排列着3个结构基因(C、prM和E)和7个非结构基因(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5),分别编码相应的蛋白。JEV是流行性乙型脑炎(简称乙脑)的病原体,经蚊虫叮咬传播。乙脑主要流行于亚洲东南亚各国及远东地区。JEV感染后往往引发严重的中枢神经系统的症状,死亡率较高,幸存者亦有半数以上发展为永久的神经系统后遗症。乙脑尚无有效的治疗手段,因此免疫接种是控制其流行、保护易感人群的重要措施,并且预防接种对于人类对抗JEV感染已发挥了良好的保护作用。目前使用的JEV疫苗主要有三种:一种是由日本研发的灭活疫苗,采用JEV感染的成年鼠脑经福尔马林灭活纯化制成;另外两种由我国开发研制,分别为原代地鼠肾细胞灭活疫苗和经SA14-14-2减毒株感染地鼠肾细胞反复传代研制而成的减毒活疫苗,由于生产标准的原因,后两者仅局限在中国境内使用。然而三种疫苗均有其局限性:灭活疫苗存在高生产成本、免疫力不持久、需多次注射及存在变态反应等缺陷;而减毒活疫苗则存在毒力回复的危险。因此亟待发展一种安全、有效、质优价廉的新型疫苗用于对抗JEV引发的世界范围内的感染。近年来,核酸DNA疫苗的出现的是替代传统疫苗的新兴策略,与传统疫苗相比,DNA疫苗具有较多的优点,主要在于:(1)在机体内以类似病毒感染的方式合成抗原,从而介导持久的细胞免疫和体液免疫;(2)DNA疫苗安全稳定,易于制备,成本低廉。业已证明JEV的结构蛋白prM-E和非结构蛋白NS1是保护性抗原位点集中的部位,将表达JEV的prM、E或是NS1的质粒免疫小鼠后,能够产生特异性的保护性免疫,因此认为prM-E-NS1基因是JEV DNA疫苗首选靶点。但是单纯的DNA疫苗尚不足以引发良好的免疫效果,为此近年来出现一个较新的策略,即在基因水平将细胞因子与核酸疫苗共同表达,利用细胞因子上调机体免疫水平的作用,进而显著增强核酸疫苗的效果。粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating