BBS1真核表达载体的构建及其对293T细胞增殖、迁移和BBS家系五个差异表达基因的影响

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目的:构建BBS1真核表达载体;探索BBS1基因对细胞的增殖及迁移是否有影响;研究BBS1基因与Annexin A1、kif2a、KIF3A、β-Tublin、β-catenin之间的关联性。方法:购买BBS1真核表达载体,通过瞬时转染将BBS1真核表达载体及其干扰载体转入293T细胞,构建BBS1上调及下调的细胞模型;运用MTS实验方法验证细胞的增殖是否受BBS1基因的调控,运用细胞划痕实验验证细胞的迁移是否受BBS1基因的影响;提取转染细胞的总RNA及总蛋白,运用qPCR、western blot等方法检测BBS1的表达情况,并分析BBS1与AnnexinA1、kif2a、KIF3A、β-Tublin、β-catenin关联性,利用SPSS软件处理、分析数据。结果:BBS1真核表达载体及干扰载体能够在293T细胞内成功表达及检测;发现293T细胞的增殖受BBS1基因的上调影响;BBS1基因的上调是否会抑制293T细胞的迁移需进一步验证;初步发现BBS1与AnnexinA1、kif2a、KIF3A、β-Tublin、B-catenin基因的相互关系,例如,在siRNA1作用下,KIF3A基因在mRNA水平的表达受BBS1基因的上调而上调;kif2a、ANXA1基因的表达不仅受BBS1基因的上调而上调,还随着BBS1基因的下调而下调。结论:Annexin A1、kif2a、KIF3A基因受BBS1基因的调控,将这些基因结合BBS疾病进行进一步的研究,可为BBS的致病机制贡献新的思路;BBS1基因对细胞增殖的抑制可为肿瘤治疗提供新的思路。
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