目的:溃疡性结肠炎(UC)作为一种慢性的炎症性肠病,其特征是腹泻便血,多种免疫细胞的活化,炎症介质的释放增加和结肠黏膜的炎症反应。巨噬细胞在肠道炎症反应中起到了重要作用,巨噬细胞会进一步激活下游信号通路促使各种炎症介质的产生最终介导炎症反应的增加。本课题中,我们从藤黄属(Garcinia Linn.)植物单花山竹子(Garcinia oligantha Merr.)中提取得到天然小分子化合物Gaudichaudione H(GH),并首次发现该化合物可以抑制巨噬细胞介导的炎症,并且抑制结肠炎小鼠的炎症反应。我们旨在检测GH在巨噬细胞和结肠炎小鼠模型中的抗炎症作用,并研究GH抗炎症作用的分子机制。方法:1.利用MTT实验检测GH对巨噬细胞存活率的影响。2.利用一氧化氮(NO)检测实验、酶联免疫吸附测定(ELISA)和定量即时聚合酶链锁反应(q RT-PCR)检测GH对巨噬细胞中炎症介质的影响。3.采用免疫印迹分析(Western Blot)检测GH对巨噬细胞中核转录因子-κB(NF-κB)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)等相关蛋白表达的影响。4.利用免疫荧光实验检测GH对转录因子NF-κB和AP-1核转位的影响。5.采用细胞内信号分子检测进一步研究GH在巨噬细胞中对信号分子蛋白的影响。6.建立葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的结肠炎小鼠动物模型,考察GH在体内的抗炎症作用。7.通过观察小鼠体重变化、疾病活动指数(DAI)和结肠长度变化来评估结肠炎的严重程度。8.采用ELISA和q RT-PCR检测GH对结肠炎小鼠的结肠组织中炎症介质的影响。9.通过苏木精和伊红(HE)染色评估结肠组织学损伤程度。10.采用免疫组化(IHC)检测巨噬细胞在结肠组织中的浸润。结果:1.GH能够在不影响细胞存活率的情况下减少巨噬细胞中炎症介质NO的产生,并且抑制诱导型一氧化氮合酶(i NOS)和环氧合酶-2(COX-2)的表达。2.GH能抑制巨噬细胞中促炎细胞因子白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的生成和m RNA表达。3.GH对巨噬细胞NF-κB、MAPK和toll样受体-4(TLR4)-髓样分化因子88(My D88)通路的激活有抑制作用,并能抑制RAW 264.7细胞中转录因子NF-κB和AP-1的核转位。4.GH可以抑制腺苷5’-单磷酸依赖的蛋白激酶α(AMPKα)、蛋白激酶B底物(PRAS40)和p38蛋白的磷酸化,提示GH发挥抗炎症作用的机制可能与能量代谢信号通路相关。5.GH能减轻DSS诱导的小鼠结肠炎的症状,缓解小鼠体重的下降,腹泻以及便血症状,并且改善结肠长度的缩短。6.GH能减少结肠炎小鼠结肠组织中IL-6和TNF-α的蛋白和m RNA表达、i NOS和COX-2 m RNA表达、结肠组织学损伤以及巨噬细胞的浸润。结论:GH能够通过抑制TLR4介导的NF-κB和MAPK信号通路的激活以及减少炎症介质的表达,从而抑制巨噬细胞介导的炎症反应,并能缓解DSS致结肠炎小鼠的炎症反应。