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尿路致病性大肠杆菌(Uropathogenic Escherichia Coli,UPEC)作为肠道外致病性大肠杆菌的一种,可导致膀胱炎、肾盂肾炎及溶血性尿毒症的发生,据统计,约有80%尿路感染由尿路致病性大肠杆菌引起,而在女性当中发病尤为普遍。国内外已有学者对其致病性的分子机制加以深入研究,作为典型的肠道外致病性大肠杆菌,除具备典型的黏附与侵入功能外,UPEC还产生一些毒素成分,如I型细胞坏死因子、α-溶血素、Chu等。溶血素是尿路致病性大肠杆菌重要的毒力因子之一,以其具备裂解红细胞的能力而得名。作为一种成孔毒素,近些年已有部分学者对大肠杆菌溶血素的表现型加以研究,发现其不仅具有裂解细胞的作用,还可通过激活细胞内典型炎症小体进而促进细胞焦亡。但是,溶血素蛋白的表达调控尚不清楚。本实验通过转座子插入失活的方法在无氧培养条件下筛选出影响尿路致病性大肠杆菌CFT073菌株溶血活性的基因位点,共筛选到包含溶血素操纵子在内的14个转座子插入位点,其中包括钼辅因子(moco)合成相关基因mobA、moeB、mogA,全局调控因子fnr,膜转运蛋白tatB及Fe-S簇合成伴侣蛋白hscA等。我们针对筛选出的钼辅因子合成相关基因进行深入研究,证明其对无氧条件下溶血素表达的影响。通过转录组测序分析,我们证实Moco通过溶血素操纵子上游与其共转录的c3566-67-68基因进而在转录水平上影响溶血素操纵子hlyCABD的表达。此外,我们也证实了Moco对溶血素表达的影响调节了尿路上皮细胞的死亡,并且在小鼠尿路感染模型中,Moco相关基因缺失影响了UPEC对尿路的定殖。为深入研究Moco相关基因影响c3566-67-68基因及溶血素操纵子hlyCABD表达的机制,我们在mobA缺失株中构建转座子随机突变库,通过对抑制子(Suppressor mutation)的筛选找出使mobA缺失株溶血活性增强的突变株。在我们筛选到的8个使mobA缺失株溶血活性增强的转座子插入基因位点中有4个基因在功能或位置上与氮代谢调控因子NtrC有关,我们也证实了无氧条件下mobA的缺失激活了氮代谢调控因子NtrC,进而通过溶血素上游c3566-67-68基因抑制溶血素操纵子hlyCABD的表达。此外,我们也发现在无氧条件下,fnr、tatB、hscA等基因均通过c3566-67-68基因簇影响溶血素操纵子的表达,揭示了c3566-67-68基因簇可能作为溶血素调控的一个重要中枢,具有十分重要的研究意义,并且有一定的疫苗研发潜力,也为防控肠道外致病性大肠杆菌病提供借鉴。