miR-214-3p通过β-连环蛋白/TCF-4信号通路抑制牙囊细胞成骨分化的体外研究

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目的:探讨MicroRNA-214-3p(miR-214-3p)通过β-连环蛋白/TCF-4信号通路对于牙囊细胞(DFCs)成骨分化中的影响。方法:通过双向差速传代法体外分离,培养与提纯牙囊细胞,通过向DFCs中转染miR-214模拟物(mimics)及抑制物(inhibitor)以此上调及下调DFCSs中的miR-214的表达。经成骨诱导7天后,通过qRT-PCR、茜素红染色、免疫蛋白印迹证明miR-214及相关成骨基因的表达变化,以及β-连环蛋白(β-catenin)/TCF-4通路相关蛋白的变化。结果:RT-qPCR结果显示:(1)DFCs成骨诱导后miR-214的表达下降。(2)使用Lipo3000将miR-214mimics与inhibitor转染进入DFCs可以相应上调及下调DFCs中miR-214的表达。(3)miR-214上调可使DFCs在成骨诱导过程中的成骨相关基因ALP(P<0.01),OSN(P>0.05),RUNX-2(P>0.05)的mRNA下调,miR-214下调可使DFCs在成骨诱导过程中的成骨相关基因ALP,OSN,RUNX-2的mRNA上调(P<0.01)。蛋白免疫印迹实验显示:miR-214上调可使β-catenin/TCF-4信号通路相关蛋白表达下调,抑制成骨分化。若下调miR-214,则结果相反。茜素红染色图片显示,转染miR-214mimics与miR-214 inhibitor的DFCs经成骨诱导后的矿化结节有明显差异。结论:(1)DFCs经成骨诱导后miR-214-3p的表达下降。(2)miR-214-3p可能通过β-catenin/TCF-4信号通路调节DFCs的成骨分化。
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