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先天性免疫(Innate Immune)是生物体抵御和清除入侵病原体的第一道防线,主要起防御、监视和维持内环境稳定的作用。免疫系统具有双向调节作用,即能清除病原体的入侵,又能防止免疫系统紊乱时发生过度免疫反应,损伤自身细胞。IL1R1(Interleukin-1 receptor 1)是细胞表面重要的免疫基因,它是白细胞介素-1(IL-1)的高亲和力受体,且在生物体炎症反应和免疫信号转导过程中起重要作用。基于该受体在免疫系统中所起的重要作用,通过调控IL1R1的表达来调节生物体免疫应答的研究也就显得尤为重要。近年研究发现了一种长22-24nt的短链非编码microRNA,它可以通过特异性约4-8个碱基的序列与靶基因的3’UTR区特异序列互补配对,进而阻断靶基因mRNA的翻译,它还可以调节机体免疫系统。鮸鱼作为重要的水产经济养殖物种,因其具有重要的食用和药用价值而广受欢迎。在本文中,我们研究了鮸鱼miR-21对其靶基因鮸鱼IL1R1的负调控作用:实验方法:主要使用了质粒构建、双荧光素酶报告基因实验、Western Blot等实验方法研究两者关系;最终得出结论:miR-21可以靶向负调控IL1R1基因表达。具体方法如下:首先,我们构建了IL1R1-3’UTR双荧光素酶报告基因质粒,通过双荧光素酶报告基因实验证实了miR-21对IL1R1-3’UTR的靶向负调控作用。同时,我们构建了鮸鱼pre-miR-21质粒,通过双荧光素酶报告基因实验进一步证实了内源性的pre-miR-21对IL1R1-3’UTR也有负调控作用。然后,通过荧光定量PCR(qRT-PCR)实验,证明了miR-21和内源性pre-miR-21均能显著抑制IL1R1转录水平表达。另外,我们通过双荧光素酶报告基因实验证实了miR-21和内源性pre-miR-21均能通过负调控IL1R1表达来抑制IL1R1对NF-κB等信号通路报告基因的激活作用。最后,通过蛋白免疫印迹实验证实miR-21在转录后水平抑制IL1R1的mRNA表达,进而导致IL1R1蛋白表达降低。综上我们得出结论miR-21通过负调控IL1R1来调节鮸鱼炎症和免疫应答。