蟾毒灵是一种水溶性差的具有广谱抗肿瘤活性的中药单体，但是，其体内半衰期短，且有心脏毒性。因此，为攻克这些难题，本课题以聚氰基丙烯酸烷酯类纳米载体作为内壳，模拟脂蛋白结构特征，在纳米粒外表面包载修饰有靶向配基的亲水蛋白，构建新型“触发式”蛋白聚合物纳米载体。本课题就蟾毒灵纳米载体的制备、载药性能、生物相容性、靶向性以及药效学等为考察方向展开工作，全文分为五项内容:　　第一项综述　　综述分两个部分内容系统阐释，首先简单介绍了蟾毒灵对多种癌症的抗肿瘤活性，其次简单综述了蟾毒灵相关纳米制剂研究进展以及聚氰基丙烯酸烷酯类载体在药物转运系统的应用。这两个部分内容契合本课题的研究内容，为后续实验工作的展开提供了理论依据。　　第二项处方前研究　　处方前研究建立了蟾毒灵HPLC体外分析方法，实验结果显示此方法具有较好的专属性，1、10、20μg/mL三个浓度的蟾毒灵样品日间精密度及日内精密度分别为1.442％与1.846％、0.692％与1.286％以及0.450％与0.256％，平均回收率依次为100.728±0.347％，100.767±1.128％和95.642±0.271％，各自的RSD％均小于2％，精密度与准确度较高，定量限为100 ng/mL，检测限为40ng/mL。高、中、低浓度的蟾毒灵样品溶液在4℃条件下储存72h，稳定性良好。室温条件下，蟾毒灵在水中的表观溶解度为40.406±0.852μg/mL;酸稳定性结果显示蟾毒灵长时间处于酸性条件下会降解。但6h内稳定性仍较好。　　第三项制备优化及质量评价　　本部分制备蟾毒灵聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒(BF-PBCA-NPs)，并以此为内壳，以熊去氧胆酸修饰的牛血清白蛋白为亲水外壳，制备蛋白聚合物“触发式”纳米载体(PPN)。利用单因素及中心复合设计法优化处方:BCA=60μL和F127∶PVA=1∶1（W/W，M总=150mg）。最佳工艺验证结果显示，BF-PBCA-NPs的包封率为71.287±2.303％，药物浓度为499.011±16.123μg/mL，平均粒径为149.3±0.6nm;蟾毒灵蛋白聚合物“触发式”纳米载体(B-PPN)的包封率为69.185±3.047％，药物浓度为484.295±21.327μg/mL，平均粒径为155.2±0.3nm，蛋白载负率高达94.406±1.651％。所制得的BF-PBCA-NPs及B-PPN大小较为均匀，呈规则圆球形，B-PPN表面较为光滑。物理化学表征结果:DSC图谱显示蟾毒灵是以无定型形态存在于纳米载体中，FTIR图谱表明蟾毒灵是共价结合在纳米载体的内部，而不是吸附在载体表面。体外释放试验结果显示以PBCA纳米粒作为药物载体具有缓释作用，在纳米粒外表面包裹修饰蛋白可增强缓释作用。　　第四项药物动力学及用药安全性研究　　建立HPLC分析法用于体内药物动力学研究，并研究各制剂的用药安全性以及在大鼠体内的药物代谢情况。方法学验证结果显示所建立的HPLC分析法满足测定要求。溶血性试验与血管刺激性试验均证实PBCA纳米载体能够增强用药安全性，PBCA纳米载体表面包裹修饰蛋白，生物相容性最好。体内药物动力学研究发现纳米粒制剂组SD大鼠体内各时间点所对应的血药浓度均比蟾毒灵原料药组所对应的血药浓度高，蟾毒灵原料药组半衰期为1.821±0.223h，而BF-PBCA-NPs以及B-PPN的体内半衰期分别为4.349±0.343h与5.495±0.193h，在同等给药剂量下，BF-PBCA-NPs的平均滞留时间是蟾毒灵游离药的1.506～2.867倍，而B-PPN的平均滞留时间是蟾毒灵游离药的1.880～3.361倍，两者的生物利用度依次为262.218％与359.398％。　　第五项组织分布学　　建立HPLC分析法用于组织分布学研究，并研究各制剂在小鼠体内组织分布情况。所建立的色谱条件不会干扰小鼠生物样品中蟾毒灵及内标物质的测定，专属性良好，且小鼠血浆以及心、肝、脾、肺、肾、肿瘤等组织中所检测的蟾毒灵在0.05～5μg/mL浓度范围内均具有良好的线性。日内、日间精密度分别为1.182％-5.993％与0.722-9.327％，小鼠血浆样品及组织样品中蟾毒灵的平均方法回收率为82.811-100.481％，平均绝对回收率为80.510-96.798％，RSD均小于10％，具有较高的精密度及准确度，可用于含量测定。最低定量限为65.0ng/mL，最低检测限为33.5ng/mL，蟾毒灵小鼠血浆样品以及心、肝、脾、肺、肾、肿瘤等各组织样品在72h内稳定。蟾毒灵原料药、BF-PBCA-NPs与B-PPN的组织药物浓度依次为心＞肾＞肝＞肺＞脾＞肿瘤，肾＞肝＞肺＞肿瘤＞心＞脾以及肾＞肺＞肝＞脾＞肿瘤＞心。制剂组各时间点的血药浓度均显著比原料药组高(P＜0.05)。PPN与PBCA纳米载体可以减少蟾毒灵在心脏的分布，蟾毒灵制剂在心脏组织的药物浓度与原料药相比较低，且无时间依赖性，基本维持在0.2μg/g以下。制剂组在肝、脾、肺等器官的组织药物浓度均比原料药组高，且B-PPN组在这几个组织所检测到的药物含量均高于BF-PBCA-NPs组，说明B-PPN能够比BF-PBCA-NPs更好的发挥器官靶向性。　　第六项体内抗肿瘤药效学与心脏毒性研究　　该部分主要研究蟾毒灵原料药以及蟾毒灵制剂在ICR荷瘤小鼠体内的肿瘤抑制作用与对心脏的毒性作用。蟾毒灵原料药、BF-PBCA-NPs以及B-PPN均具有不同程度的抗肿瘤作用，在给药量相同的情况下，BF-PBCA-NPs组与B-PPN组的肿瘤体积生长速度比蟾毒灵原料药组缓慢，B-PPN组荷瘤小鼠的肿瘤生长速度最慢，肿瘤抑制率结果显示BF原料药组的抑瘤率为48.236％，BF-PBCA-NPs给药组与B-PPN给药组的抑瘤率分别为58.581％(P＞0.5)与73.207％(P＜0.5)。与蟾毒灵原料药组小鼠的生存期（16.0天）相比，制剂组小鼠的生存期显著延长，BF-PBCA-NPs组可存活23.5天(P＜0.5)，而B-PPN组荷瘤小鼠可存活26.5天(P＜0.5)。BF原料药具有心脏毒性作用，以PBCA-NPs或PPN为载体可以降低该毒性作用，且B-PPN所具有的心脏毒性最弱。