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第一部分miR-30e-5p在胰腺癌组织中的表达及与胰腺癌临床病理特征的关系目的:探讨miR-30e-5p在胰腺癌组织的表达情况及与胰腺癌临床病理特征的关系。方法:收集2016年7月至2019年8月期间在广西医科大学第一附属医院住院的48例配对胰腺癌及其癌旁胰腺组织,所有患者均经病理确诊为胰腺癌。采用miRNeasy FFPE试剂盒提取RNA,q RT-PCR检测胰腺癌组及癌旁组中miR-30e-5p的表达水平。采用Pearson相关分析法对miR-30e-5p的表达水平与胰腺癌患者的年龄、性别和TNM分期进行临床相关分析。结果:（1）胰腺癌组患者组织中miR-30e-5p的基因表达水平低于癌旁组（P<0.01）,差异有统计学意义。（2）miR-30e-5p表达水平在患者不同性别、年龄和TMN分期比较差异均未达到统计学显著性。结论:miR-30e-5p在胰腺癌及其癌旁组织中显著差异表达,提示miR-30e-5p可能在胰腺癌的发生发展发挥重要作用。第二部分miR-30e-5p在体外对胰腺癌细胞生物学功能的影响目的:通过在人胰腺癌细胞株转染miR-30e-5p进行体外细胞实验,探讨miR-30e-5p对人胰腺癌细胞生物学功能的影响。方法:采用脂质体法在人胰腺癌细胞株Bx PC-3和PANC-1细胞转染阴性对照（negative control,NC）、miR-30e-5p mimics和miR-30e-5p inhibitor,将转染后的细胞分为NC组、miR-30e-5p mimics组和miR-30e-5p inhibitor组。q RT-PCR法检测Bx PC-3和PANC-1细胞各组的miR-30e-5p表达;MTT法检测Bx PC-3和PANC-1细胞各组的细胞活力;细胞克隆形成实验检测Bx PC-3和PANC-1细胞各组的集落形成能力;细胞侵袭实验（Transwell法）检测Bx PC-3和PANC-1细胞各组的侵袭能力;细胞迁移实验检测Bx PC-3和PANC-1细胞各组的迁移能力;流式细胞术检测Bx PC-3和PANC-1细胞各组的凋亡率;流式细胞术检测Bx PC-3和PANC-1细胞各组的细胞周期。结果:（1）q RT-PCR实验发现,在Bx PC-3和PANC-1细胞中,miR-30e-5p mimics组的miR-30e-5p的基因表达水平较NC组明显上升,差异均有统计学意义（P<0.001）。（2）MTT实验发现,与NC组相比,miR-30e-5p mimics组均能抑制Bx PC-3和PANC-1细胞的细胞活力,差异均具有显著性（P<0.05）;miR-30e-5p inhibitor组均能增加Bx PC-3和PANC-1的细胞活力,差异均具有显著性（P<0.05）。（3）细胞克隆形成实验发现,与NC组相比,miR-30e-5p mimics组均能抑制Bx PC-3和PANC-1细胞的集落形成能力,差异均有统计学意义（P<0.001）;miR-30e-5p inhibitor组均能促进Bx PC-3和PANC-1细胞的集落形成能力,差异均有统计学意义（P<0.001）。（4）细胞侵袭实验显示,与NC组相比,miR-30e-5p mimics组均能抑制Bx PC-3和PANC-1细胞的侵袭能力,差异均有统计学意义（P<0.01）;miR-30e-5p inhibitor组均能促进Bx PC-3和PANC-1细胞的侵袭能力,差异均有统计学意义（P<0.05）。（5）细胞迁移实验显示,与NC组相比,miR-30e-5p mimics组均能抑制Bx PC-3和PANC-1细胞的迁移能力,差异均有统计学意义（P<0.01）;miR-30e-5p inhibitor组均能促进Bx PC-3和PANC-1细胞的迁移能力,差异均有统计学意义（P<0.05）。（6）细胞凋亡实验显示,与NC组相比,miR-30e-5p mimics组均能促进Bx PC-3和PANC-1细胞凋亡,差异均有统计学意义（P<0.01）;miR-30e-5p inhibitor组能抑制Bx PC-3和PANC-1细胞凋亡,差异均有统计学意义（P<0.05）。（7）细胞周期实验发现,与NC组相比,miR-30e-5p mimics组和miR-30e-5p inhibitor组均未能干预Bx PC-3和PANC-1的各期细胞周期。结论:胰腺癌中高表达的miR-30e-5p能够显著抑制胰腺癌细胞的增殖、侵袭、迁移和促进凋亡,提示miR-30e-5p在胰腺癌发生发展过程中可能发挥着抑癌作用。第三部分miR-30e-5p及其潜在靶基因SNAI1的关系研究目的:通过miRNA数据库预测miR-30e-5p潜在靶基因SNAI1和结合位点,并通过双荧光素酶和q RT-PCR验证是否能与SNAI1位点结合。方法:通过Target Scan网站预测miR-30e-5p靶基因SNAI1及其结合位点,通过构建SNAI1的WT和MUT载体转染393T细胞,将细胞分为WT+NC组、WT+miR-30e-5p mimics组、MUT+NC组和MUT+miR-30e-5p mimics组,通过PCR验证是否能与SNAI1位点结合。采用q RT-PCR法检测转染NC、miR-30e-5p mimics和miR-30e-5p inhibitor后Bx PC-3和PANC-1细胞各组SNAI1的表达水平。结果:（1）通过miRNA靶基因预测网站查询到miR-30e-5p与SNAI1有结合位点。（2）双荧光素酶的报告发现,WT+miR-30e-5p mimics组的相对荧光素酶读数较WT+NC组显著性下调（（P<0.01））;而MUT+NC组和MUT+miR-30e-5p mimics组之间无显著性差异。（3）q RT-PCR实验发现,与NC组相比,在Bx PC-3和PANC-1细胞中,SNAI1基因的表达水平在miR-30e-5p mimics组均下降,均有显著差异性（P<0.001）;反之,SNAI1基因的表达水平在miR-30e-5p inhibitor组均上升,均有差异性（P<0.05）。结论:miR-30e-5p可能通过影响靶基因SNAI1的翻译进而减少蛋白质表达参与胰腺癌的发病机制。第四部分miR-30e-5p表达对胰腺癌细胞转录组的影响目的:探讨miR-30e-5p在胰腺癌细胞中可能调控的基因,阐明其在胰腺癌发生、发展过程中的可能机制。方法:通过脂质体转染法在PNAC-1细胞转染NC、miR-30e-5p mimics和miR-30e-5p inhibitor,分为NC、mimics和inhibitor 3个组。通过转录组测序技术检测细胞3个组的基因表达谱,通过生物信息学方法比较mimics组VS NC组和inhibitor组VS NC组细胞间的差异表达基因（DEGs）。对mimics组和inhibitor组患者的DEGs行基因本体论（GO）功能富集及京都基因和基因组百科全书（KEGG）通路富集分析;对mimics组和inhibitor组的DEGs行预后分析;mimics组和inhibitor组利用以NC组作为对照富集到结果行基因集富集分析（GSEA）。结果:（1）转染miR-30e-5p后,mimics组筛选出253个DEGs,inhibitor组筛选出63个DEGs,mimics组DEGs主要富集在双向调控基因的表达和表观遗传、细胞蛋白质代谢过程等,inhibitor组主要富集在核酸的调控、以DNA为模板的转录调控、DNA模板转录等生物学过程。（2）预后分析显示mimics组和inhibitor组的DEGs与胰腺癌患者预后密切相关。（3）GSEA分析显示mimics组GO主要富集在调节炎症反应、调节免疫反应和双向控血管内皮生长因子的产生等。mimics组KEGG可以显著富集在β-catenin、MMP-14、Interleukin-7、NCAM1和COMP等信号通路。结论:miR-30e-5p非常有可能通过EMT影响胰腺癌的发生发展。第五部分miR-30e-5p靶向SNAI1调控EMT对胰腺癌抑癌作用的分子机制的探讨目的:探讨miR-30e-5p靶向SNAI1调控EMT对胰腺癌抑癌作用的分子机制。方法:采用慢病毒感染法在人胰腺癌细胞株Bx PC-3和PANC-1感染过表达SNAI1（OE-SNAI1）慢病毒后,再转染NC、miR-30e-5p mimics和miR-30e-5p inhibitor进行实验,将细胞分为OE-SNAI1+NC组、OE-SNAI1+miR-30e-5p mimics组和OE-SNAI1+miR-30e-5p inhibitor组。MTT法检测Bx PC-3和PANC-1细胞各组的细胞活力;细胞克隆形成实验检测Bx PC-3和PANC-1细胞各组的集落形成能力;细胞侵袭实验（Transwell法）检测Bx PC-3和PANC-1细胞各组的侵袭能力;细胞迁移实验检测Bx PC-3和PANC-1细胞各组的迁移能力;流式细胞术检测Bx PC-3和PANC-1细胞各组的凋亡率;流式细胞术检测Bx PC-3和PANC-1细胞各组的细胞周期;Western blot检测Bx PC-3和PANC-1细胞各组的SNAI1、E-cadherin、N-cadherin和MMP-9等EMT相关蛋白表达。结果:（1）MTT实验结果显示,与OE-SNAI1+NC组相比较,OE-SNAI1+miR-30e-5p mimics组均能抑制Bx PC-3和PANC-1细胞的细胞活力,差异均具有显著性（P<0.05）;OE-SNAI1+miR-30e-5p inhibitor组均能增加Bx PC-3和PANC-1的细胞活力,差异均具有显著性（P<0.05）。（2）细胞克隆形成实验显示,与OE-SNAI1+NC组相比,OE-SNAI1+miR-30e-5p mimics组能抑制Bx PC-3和PANC-1细胞的集落形成能力,差异均有统计学意义（P<0.05）,OE-SNAI1+miR-30e-5p inhibitor组能促进Bx PC-3和PANC-1的集落形成能力,差异均有统计学意义（P<0.05）。（3）细胞侵袭实验发现,与OE-SNAI1+NC组相比,OE-SNAI1+miR-30e-5p mimics组均能抑制Bx PC-3和PANC-1细胞的侵袭能力,差异均有统计学意义（P<0.05）;OE-SNAI1+miR-30e-5p inhibitor组能促进Bx PC-3和PANC-1的侵袭能力,差异均有统计学意义（P<0.05）。（4）细胞迁移实验发现,与OE-SNAI1+NC组相比,OE-SNAI1+miR-30e-5p mimics组能抑制Bx PC-3和PANC-1细胞的迁移能力,差异均有统计学意义（P<0.05）;而OE-SNAI1+miR-30e-5p inhibitor组能促进Bx PC-3和PANC-1的迁移能力,差异均有统计学意义（P<0.05）。（5）细胞凋亡实验发现,与OE-SNAI1+NC组相比较,OE-SNAI1+miR-30e-5p mimics组能促进Bx PC-3和PANC-1细胞凋亡,差异有统计学意义（P<0.05）;OE-SNAI1+miR-30e-5p inhibitor组对细胞凋亡无影响。（6）细胞周期实验发现,与OE-SNAI1+NC组相比较,OE-SNAI1+miR-30e-5p mimics组在PANC-1细胞G1期比例有所降低（P<0.05）,S期的比例升高（P<0.05）,余各组对细胞周期G1、S和G2各期无明显影响。（7）Western blot实验发现,与NC组相比,E-cadherin蛋白在Bx PC-3和PANC-1细胞的miR-30e-5p mimics组中表达上调（P<0.001）;而在Bx PC-3和PANC-1的miR-30e-5p inhibitor组中表达下调（P<0.05）,差异均有统计学意义。N-cadherin蛋白在Bx PC-3细胞的miR-30e-5p mimics组中表达下调（P<0.001）;而在Bx PC-3和PANC-1细胞的miR-30e-5p inhibitor组中表达上调（P<0.01）,差异均有统计学意义。SNAI1蛋白在Bx PC-3和PANC-1细胞的miR-30e-5p mimics组中表达下降（P<0.05）;而在Bx PC-3和PANC-1的miR-30e-5p inhibitor组中表达上调（P<0.01）,差异均有统计学意义。MMP-9蛋白在Bx PC-3和PANC-1细胞的miR-30e-5p mimics组中表达下调（P<0.05）;在PANC-1细胞的miR-30e-5p inhibitor组中表达上调（P<0.01）,差异有统计学意义。结论:miR-30e-5p可能通过miR-30e-5p-SNAI1-EMT调控轴调控胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡等肿瘤生物学行为。