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目的:①比较<3>H-TdR与<125>I-UdR掺入法测定正常淋巴细胞及淋巴瘤细胞的增殖效应,探讨用<125>I-UdR替代<3>H-TdR作为示踪剂的可能性;②研究<125>I脱氧尿嘧啶核苷(<125>I-UdR)杀伤淋巴瘤细胞的能力、作用条件和特点、影响因素,探讨<125>I-UdR作为治疗恶性淋巴瘤药物的可能性。
方法:①用酸氧化法标记<125>I-UdR;②分别用<3>H-TdR与<125>I-UdR两种示踪剂对正常淋巴细胞及淋巴瘤细胞Daudi做掺入试验,测其掺入分数并进行比较;③测量淋巴瘤细胞Raji和Daudi的细胞和细胞核在含不同放射性浓度<125>I-UdR的RPMI1640培养液中培养不同时间时的放射性活度,计算每106个细胞和细胞核摄取<125>I-UdR的量;用MTT实验来评价<125>I-UdR对Raji和Daudi细胞的杀伤作用,结合流式细胞仪检测<125>I-UdR对淋巴瘤Raji和Daudi细胞周期的影响、DNA靶向性作用和细胞凋亡的作用。
结果:①用酸氧化法标记的<125>I-UdR,它的放射化学纯度可达99.63%±0.06%,并且在4℃下放置60天时其放化纯仍达98.25%±0.04%;②就正常淋巴细胞而言,<3>H-TdR和<125>I-UdR的掺入分数分别为20.95%±1.06%和1.00%±0.04%:对于淋巴瘤Daudi细胞,<3>H-TdR和<125>I-UdR的掺入分数分别为29.94%±4.10%和6.02±0.73%;无论淋巴细胞还是淋巴瘤细胞,<3>H-TdR掺入法都明显高于<125>I-UdR掺入法,P<0.01,具有统计学差异;无论<3>H-TdR掺入法还是<125>I-UdR掺入法,淋巴瘤细胞的掺入分数均高于正常淋巴细胞,P<0.05。③Raji细胞和Daudi细胞摄取<125>I-UdR的量明显高于Na<125>I对照组,P<0.01;细胞和细胞核中<125>I-UdR的量随培养基中<125>I-UdR放射性浓度以及培养时间的增加而增加;<125>I-UdR组的存活分数明显低于Na<125>I对照组(P<0.01),细胞存活分数随培养基中放射性浓度增加而降低。
结论:①酸氧化法标记的<125>I-UdR,放射化学纯度很高,并且体外稳定性良好,适合4℃保存;②对淋巴细胞和淋巴瘤细胞而言,<3>H-TdR掺入法都明显高于<125>I-UdR掺入法(P<0.01);无论<3>H-TdR掺入法还是<125>I-UdR掺入法,淋巴瘤细胞的掺入分数均高于正常淋巴细胞(P<0.05)。③<125>I-UdR可特异性地被淋巴瘤细胞Raji和Daudi迅速摄取并进入细胞核中,在细胞内形成持续的放射性浓聚,进而杀死细胞,这一过程具有明显的时间-效应和剂量-效应关系,<125>I-UdR有可能成为一种较有应用前景的淋巴瘤治疗药物。