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多肽类物质的肿瘤抑制活性正逐渐为人们所重视,小分子肽的肿瘤抑制作用逐渐成为研究的热点。为筛选出具有HepG2细胞增殖抑制活性的绿豆多肽,本文以绿豆分离蛋白为原料,采用不同酶进行单一酶、双酶酶解制备绿豆活性肽,以水解度和HepG2细胞增殖抑制率为指标,采用CCK-8法测定抑制率,考察水解度与抑制率的关系;对抑制率相对较高的绿豆活性肽,采用超滤和优化的Sephadex G-15凝胶色谱条件进行进一步分离纯化。并利用LC-MS/MS联用技术对分离出的抑制率最高的绿豆HepG2细胞抑制肽进行结构鉴定。主要研究结果如下:（1）考察四种酶解产物的水解度及HepG2细胞增殖抑制率,水解度大小为:双酶酶解产物>碱性蛋白酶酶解产物>木瓜蛋白酶酶解产物>中性蛋白酶酶解产物,抑制率大小为:木瓜蛋白酶酶解产物>双酶酶解产物>中性蛋白酶酶解产物>碱性蛋白酶酶解产物,结果表明,绿豆活性肽水解度大小与其抑制率高低并非呈正相关,并筛选出木瓜蛋白酶作为制备绿豆活性肽的最佳酶,该绿豆活性肽对HepG2人肝癌细胞具有明显的增殖抑制作用,并且呈现一定的剂量效应,在16 mg/mL时,抑制率为78.74%,48 h的IC50值为2.99mg/mL。（2）绿豆活性肽超滤后得到>3 kDa和<3 kDa两个组分。<3 kDa组分的抑制率高于>3 kDa组分,抑制率为62.28%。采用葡聚糖Sephadex G-15凝胶色谱分离<3 kDa组分,并确定了最佳的洗脱条件:洗脱液:0.01 mol/L乙酸溶液,流速:0.3 mL/min,每8min收集1管,共收集70管。在此条件下,得到5个组分A-E,其中组分A对HepG2细胞具有显著的增殖抑制作用,抑制率达86.35%。（3）通过高效液相色谱法,测得组分A分子量主要集中在1000 Da以下,占总量的89.52%,分子量在1000 Da以上的部分较少,只占总量的10.4%;绿豆活性肽分子量集中在2000Da以下,占总量的90.28%。（4）通过Q Exactive Plus质谱对组分A进行结构鉴定出5条肽段,其中4条短肽段的氨基酸序列为:LAFGINAENNQRN,VEGINKIVTGNL,EGAPLEDIAEEEEQ和PQGEVSTSVAADQ,其中主要含有Ala、Asn、Gly、Glu、Gln、Ile等氨基酸,含有这些氨基酸的活性肽段可能在抑制HepG2细胞增殖过程中发挥主要作用。