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真核生物体内通过MAPKKK-MAPKK-MAPK三级级联反应(MAPK inasecasade)将细胞表面接收到的信号逐步传递到细胞内部,从而调控细胞内多种生理反应。MEKK作为MAPK信号级联系统的上游激酶,可以在H-Ras、TRAF2和Caspase3等的作用下,激活下游的MAPKK,磷酸化MAPK调节细胞分化、增殖、迁移、凋亡,在免疫、炎症反应中发挥作用。杂交鳢是一种生长快、产量高、抗病性强的重要淡水养殖品种,随着养殖密度增加、水质污染等因素,面临着许多病害威胁。鰤诺卡氏菌、舒伯特气单胞菌感染杂交鳢后引起的“结节病”和“类结节病”已经对杂交鳢养殖业形成了巨大威胁,但杂交鳢对于这两种病原菌的免疫应答机制尚不清晰。在论文中我们首次克隆了杂交鳢MEKK家族的MEKK3、MEKK4、MLK3及其相关基因Caspase3、H-Ras、TRAF2等六个基因。Cma MEKK3的ORF全长为1851 bp,预测编码616 aa;Cma MEKK4的ORF全长为4617 bp,预测编码1538 aa。Cma MLK3的ORF全长为3144 bp,预测编码1047 aa。Cma Caspase 3的ORF全长为854 bp,预测编码283 aa;Cma H-Ras的ORF全长为564 bp,预测编码187 aa;Cma TRAF2的ORF全长为1566 bp,预测编码521 aa。第二,分析以上6个基因在杂交鳢中组织表达分布,结果显示它们在免疫相关组织中表达量较高,其中,Cma MEKK3在头肾中表达量最高,Cma MEKK4、Cma MLK3在血液中表达量最高,Cma Caspase3、Cma TRAF2在脾脏中表达量最高,Cma H-Ras在后肠中表达量最高,推测杂交鳢6个基因在免疫反应中发挥非常重要的作用。另外,在杂交鳢被鰤诺卡氏菌和舒伯特气单胞菌感染后,分析了这6个基因在肝脏、脾脏和头肾中的表达模式,结果显示它们在两种病原菌感染后会出现不同程度的上调或下调,且对两种病原菌感染的应答反应有所区别,推测其参与杂交鳢病原菌感染的免疫防御反应,但对不同细菌感染的免疫应答模式有所差别。第三,分离健康杂交鳢的头肾中白细胞,采用病原物poly(I:C)、LPS和LTA对其刺激,在不同6个时间点检测目的基因表达情况。结果提示各基因在细胞和机体中对于病原的感染应答情况并不相同,推测其在细胞中和机体中受到外源刺激后的应答机制不完全相同。最后,对Cma MEKK3、Cma Caspase3和Cma H-Ras这三个基因进行了人胚肾HEK293细胞中亚细胞定位和双荧光素酶报告基因的检测。结果发现Cma MEKK3在细胞质表达,细胞核不表达,而Cma Caspase3、Cma H-Ras不仅在细胞质表达,也在细胞核表达,Cma MEKK3、Cma Caspase3对于NF-κB有显著性的激活作用,Cma H-Ras对于转录因子AP-1和NF-κB都有显著性的激活作用。