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国槐(Sophora japonica L)又称槐树、家槐,原产中国,是豆科槐属的落叶乔木,是一种集材用、药用、食用、观赏于一身的高效树种,由于其具有生长快、寿命长、树姿优美、遮荫面积大,耐干旱、抗逆性强等特性,在我国很多地区普遍栽培.为了进一步提高国槐的耐盐抗旱性,扩大其适宜种植的范围,获得更好的经济效益和生态效益,本试验对国槐进行了高频再生体系的建立及农杆菌介导的耐盐基因(BADH)转化的研究.本项研究以优良耐盐单株上的种子为材料,建立了组培再生技术体系,进行了农杆菌介导的BADH基因转化研究,希望通过基因转化生物技术获得抗盐新种质.本试验主要研究结果如下:1.建立了国槐大叶片再生体系.国槐大叶片在诱导芽的分化培养基上表现出较高的分化能力,此大叶片为建立国槐再生体系的最佳外植体.大叶片在分化培养基MS+6-BA4.0mg.L<-1>+IBA0.25mg.L<-1>(简称MA)上分化效果最好,在此培养基上培养60天(暗培养10~15天)后平均每个大叶片可分化出8~9个芽.从国槐大叶片创伤后进行暗培养启动分化,到大叶片上有再生芽出现以及后面的继代快繁培养,均用同一种培养基,建立了一个及为简捷的再生体系.国槐幼苗的生根率很低,即使在生根效果最好的培养基1/2MS+NAA0.5mg.L<-1>+蔗糖30mg.L<-1>上,生根率也仅为33﹪.如何提高生根率还需进一步研究.2.建立了BADH基因转化体系.头孢霉素浓度为400mg.L<-1>时抑制和去除农杆菌效果最佳,同时该浓度的头孢霉素对国槐大叶片愈伤组织的形成及芽分化影响不大.国槐大叶片对卡那霉素较再生出的幼苗敏感,在Kan25mg.L<-1>时就完全抑制芽的分化,本试验采用延迟选择的方法,在延迟选择的不同阶段所用选择压不同,这样的选择方法显著提高了转化效率.以侵染后具有再生能力的大叶片百分率和产生抗性芽数量为评价依据建立和优化了转化体系;大叶片无需预培养,用其分化培养的液体培养基重悬菌液,侵染浓度为OD<,600>值0.3~0.5;侵染时间10~15分钟;共培养2~3天;侵染后的国槐大叶片在分化培养基上培养30天后,用选择压25mg.L<-1>培养基筛选30天,而后再用选择压50mg.L<-1>培养基连续筛选90天,获得的抗性植株进行PCR检测.3.抗性植株的PCR检测.试验获得了大量Kan抗性植株,在所进行PCR检测的64株抗性植株中获得了16株抗性阳性植株,阳性检测率高达25﹪.