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游离β人绒毛膜促性腺激素(free β human chorionic gonadotrophin,f-β-hCG)和甲胎蛋白(Alpha fetoprotein,AFP)是临床上常用的妊娠期相关疾病检测指标,同时也作为肿瘤标志物应用于临床。目前该项目常用的定量方法主要为化学发光免疫分析法和时间分辨免疫荧光检测,化学发光是最重要的一个分支,但目前国内市场几乎被国外大公司所垄断,临床上使用的仪器、试剂绝大部分为价钱昂贵的进口产品。本课题拟通过学院实验室与达瑞公司的化学发光免疫分析平台,建立游离β人绒毛膜促性腺激素和甲胎蛋白的化学发光免疫分析法,并进行性能评价,将两种临床上重要的试剂“国产化”,为疾病防治与控制做出实质性社会贡献。目的:建立定量测定游离β人绒毛膜促性腺激素和甲胎蛋白化学发光免疫分析法,并对其性能进行评价。方法:1.利用双抗体夹心法,对反应步骤进行筛选,建立游离β人绒毛膜促性腺激素和甲胎蛋白定量测定的化学发光免疫分析法。2.对游离β人绒毛膜促性腺激素和甲胎蛋白两种自制化学发光免疫试剂进行性能评价,评价指标包括:最低检测限、准确度、重复性、批间精密度、特异性、参考范围及与同类进口试剂的临床样本检测等效性。结果:经过筛选,选用了二步法反应步骤建立了检测试剂反应模式;对游离β人绒毛膜促性腺激素和甲胎蛋白两种自制化学发光免疫试剂进行方法学评价,结果如下:f-β-hCG试剂:最低检测限可达0.006ng/mL,准确性相对偏差在2.56%-4.43%之间,线性在0-200ng/mL之间,相关系数R2=0.99999,重复性CV值均小于8%,批间CV值均小于15%;和用对照试剂盒检测出的结果有显著的相关性,一致性达0.965,线性回归方程为y=1.131x+0.826,相关性r值为0.992,两种试剂盒检测结果具有较高的一致性。AFP试剂:最低检测限可达0.0083ng/mL,准确性相对偏差为0.39%,线性在0-1000ng/mL之间,相关系数R2=1,重复性CV值在2.36%-3.60%之间,均小于8%,批间CV值均小于15%;和用对照试剂盒检测出的结果有显著的相关性,一致性达0.989,线性回归方程为y=0.980x-0.498,相关性r值为0.959,自制试剂盒与对比试剂盒测定的结果一致性较高。结论:上述结果表明本课题成功研制出游离β人绒毛膜促性腺激素和甲胎蛋白化学发光免疫标记试剂,各项指标(最低检测限、准确度、重复性、特异性、批间精密度)都满足临床检测试剂的技术要求,有望进一步开发与国内外同类试剂产品共享市场。