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本试验的目的是对现有的且在实际应用中效果较好的公猪精液稀释液的组成成分加以改进,探讨了公猪精液稀释剂加工和保存过程中各原料试剂配伍后可能产生的化学反应及对稀释剂质量的影响、各原料试剂最适宜的消毒灭菌方法、公猪精液中常见病原微生物的种类,在不影响精液于16-18℃保存效果的前提下尽可能降低稀释剂的成本,使之能在生产中大规模广泛应用。试验结果如下:
1.不同稀释液配方对公猪精液保存效果的影响:在5个稀释液配方中,以配方5的保存效果最好。配方4和配方5在多数时间内对活精子数、顶体不完整率、VAP、VSL和VCL的影响差异不显著(P>0.05),但配方4和配方5对上述指标的影响显著好于配方1、配方2和3(P<0.05)。
2.公猪精液中细菌的分离培养、生化鉴定和药敏试验:本次试验共鉴定出五种病原菌,主要有大肠杆菌、克雷伯菌、变形杆菌、棒状杆菌以及沙门氏菌。五种病原菌对环丙沙星、氧氟沙星和恩诺沙星等喹诺酮类药物极度敏感,在所选抗生素中喹诺酮类药物效果最好。
3.原料混合消毒后的结果及保存半年后对公猪精液保存效果的影响:结果表明,原料经过混合消毒后,发现不能混合保存的原料有L-半光氨酸、Tris、柠檬酸。对照组与干热消毒、臭氧消毒和未消毒组的稀释粉在保存半年后配成稀释液在16-18℃保存精液的结果:干热消毒的保存效果最好,但是差异不显著(P>0.05)。经过不同方法消毒稀释剂保存半年后配制成稀释液后,用于保存公猪精液时对精液中细菌生长菌落数的影响中,干热消毒原料配置成稀释液对精液中细菌数的生长显著低于其他组(P<0.05)。
4.稀释液中L-半胱氨酸及其类似物的替代对公猪精液保存效果的影响:在对照组、L-半胱氨酸盐酸盐、N-乙酰半胱氨酸和L-半胱氨酸对公猪精液的保存中,对照组保存效果最差,L-半胱氨酸和N-乙酰半胱氨酸的保存效果最好,两者之间差异不显著(P>0.05)。在稀释剂中使用BR级与AR级Tris和添加BSA与不添加的两组比较中,两组各在活精子数、活力、VAP、VSL、VCL和HOST等指标上差异不显著(P>0.05)。
5.公猪精液在16-18℃环境下,在0-3天的保存中且活力在0.5以上时,在IVF试验中对卵母细胞的卵裂率、16细胞发育率和囊胚率等指标差异不显著(P>0.05),但结果也表明随着保存时间延长而囊胚率下降,可能是保存时间延长使精子的衰老程度增加以致虽然早期可受精但随后继续发育会受影响。
6.日本稀释剂、改进稀释剂对公猪精液在16-18℃保存的效果表明,对精子活力的影响差异不显著(P>0.05),同样对母猪的受胎率和产仔率差异也不显著(P>0.05)。而在三个稀释剂对公猪精液活力影响的比较中,亚卫稀释剂的保存效果最差。