人及小鼠味蕾细胞的培养研究

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背景:味觉是由外部刺激作用口腔内的味蕾所引起的感觉,是人及动物感知外界刺激的一种重要方式之一。味觉在维持体内能量平衡和内稳态平衡中起重要作用。在临床上有一些疾病(如舌癌)及疾病治疗方案(如头颈部肿瘤放疗)可引起患者出现味觉障碍,甚至味觉丧失。目前味觉的研究相比于视觉、听觉和嗅觉的研究严重滞后,对于临床中存在的味觉异常无法及时干预和治疗。如果能够从体外培养的味蕾细胞进行探索,将会极大地加速味觉的研究。目前很少有成功培养出味蕾细胞的报道,因此,建立人及ICR小鼠的味蕾细胞体外培养方法是非常必要的。目的:建立一种稳定良好的人及ICR小鼠味蕾细胞培养方法。方法:1.利用HE染色和免疫组织化学方法确定舌背粘膜上味蕾的存在部位。2.取临床舌肿物手术扩大切除的正常味觉乳头及ICR小鼠味觉乳头组织,利用组织块培养法和酶消化获得味蕾细胞法进行味蕾细胞的培养。3.以味蕾细胞特异性蛋白对培养出的细胞进行免疫学鉴定。结果:1.舌背粘膜HE染色发现,菌状乳头、叶状乳头、轮廓乳头含有味蕾,丝状乳头不含味蕾。2.舌背粘膜α-gustducin免疫组织化学和免疫荧光显示味蕾中约有20%~30%的细胞胞质被标记;在CK8免疫组化和免疫荧光显示味蕾中的细胞胞质均被标记。3.组织块培养法和酶消化法均能从舌背味觉乳头中获得味蕾细胞,并能在体外培养味蕾细胞15d-18d。4.体外培养的味蕾细胞在失去神经支配后能够存活18d,并仍能够表达一些特异性蛋白(α-gustducin、CK8)。结论:1.通过酶消化法对人和ICR小鼠味觉乳头消化处理,建立了一种短期的味蕾细胞体外培养方法,体外培养的味蕾细胞短期内仍能够表达一些特异性蛋白。2.建立了一种轮廓乳头组织块培养味蕾细胞的方法。
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