Forkhead家族蛋白是一类含有一个保守的DNA结合结构域为特征的转录调控子家族,存在于所有的真核生物中。在Forkhead转录因子家族中,FoxO亚族包括Fox01,Fox03,Fox04和Fox06四个成员。通过酵母双杂交实验,我们得到一个新的FoxO结合蛋白,并将其命名为FBPl。在HEK293T细胞内过表达Flag标签的FoxO蛋白家族成员FoxO1,FoxO3a,FoxO4,然后通过免疫沉淀反应实验分析,我们发现FoxO蛋白家族成员分别能免疫沉淀内源性的FBP1蛋白。为了探究FoxO蛋白家族成员FoxO1蛋白与FBP1蛋白之间是否有直接的相互作用,我们将人的FoxO1基因和人的FBP1基因序列分别克隆到pGEX4T-1和pET21b载体上,并进行体外蛋白诱导表达,通过GST-pulldown实验验证了FoxO1蛋白与FBP1蛋白之间有直接的相互作用。通过His-pulldown实验进一步确定了FoxO1蛋白与FBP1蛋白相互作用的结构域位于FoxO1蛋白的DNA结合结构域,即aa150-270。　　 我们进一步设计如下实验来探讨FoxO1-FBP1复合体的生物学效应。在HCT116细胞中,敲低FoxO1基因并不影响FBP1蛋白的表达,而敲低FBP1基因则导致FoxO1蛋白水平的降低,提示FBP1蛋白有可能影响FoxO1的表达水平。由于FoxO1参与细胞自噬的代谢过程,且FBP1对FoxO1蛋白水平有调节的作用,这些证据提示FBP1有可能与细胞自噬有关。为了验证该假设,我们在FBPl敲低的细胞中检测自噬标记分子p62蛋白和LC3Ⅱ蛋白的水平,我们发现p62蛋白水平上调而LC3Ⅱ蛋白水平下调;透射电镜实验显示,在敲低FBP1基因的HCT116细胞中,细胞内畸形线粒体的数量显著增加,线粒体发生肿胀甚至呈空泡状。以上证据提示FBP1基因敲低后细胞自噬存在缺陷。　　 鉴于FoxO1在细胞自噬中的重要作用,我们的结果提示FBP1可能通过与FoxO1蛋白相互作用来影响FoxO1的表达水平,进而影响细胞自噬过程。