目的: 对于缺血性脑卒中急性期的治疗,溶栓治疗是目前公认最有前景的治疗方法,但同时带来的再灌注损伤限制了其在临床上的应用。再灌注损伤是一个多环节、多级联的病理生理过程,因为中药复方存在化学成分多样性及生物活性广泛性的特性,从而为阻断脑缺血再灌注损伤发生、发展的多途径、多水平损害提供了理论上的可能性。涤痰汤是中医治疗以痰证为主要病机的脑部疾患的常用方剂,有大量临床研究表明,以涤痰汤化裁治疗缺血性脑卒中有确切疗效,故本研究拟观察涤痰汤对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。有人认为中医的痰与现代医学的炎症因子及其产物密切相关,故拟从对缺血再灌注损伤大鼠脑组织TNF-α表达及细胞凋亡率的影响方面探讨涤痰汤的保护机制。本实验可为开发有效的神经保护剂提供科学依据,从而扩大溶栓治疗的临床应用。 方法: 清洁级成年Wistar大鼠54只,体重250～300g,随机分为假手术组、模型组和涤痰汤组。采用改良线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,缺血2h后实现再灌注。待大鼠苏醒,假手术组及模型组予生理盐水灌胃,治疗组予涤痰汤灌胃,每日2次,连续3天。术后72h,观察各组大鼠的整体状念、神经功能缺损程度、脑组织含水量、脑梗死范围、病理形念学的改变,并采用免疫组化法检测脑组织TNF-α的表达情况和采用流式细胞仪检测脑细胞凋亡率的变化。 结果: 1.术后24h假手术组大鼠精神状态良好,饮食正常,整体状态同术前。模型组和涤痰汤组精神明显较术前差,饮食减少,毛色暗淡,自发活动明显减少。术后72h,模型组整体状态无明显改善,与模型组比较,涤痰汤组大鼠整体状态有明显改善。 2.术后2h,假手术组大鼠无神经功能缺损,模型组、涤痰汤组大鼠神经功能缺损评分均为1分;术后24h,模型组、涤痰汤组大鼠神经功能缺损程度皆明显加重;术后72h,涤痰汤组大鼠神经功能缺损程度明显改善,与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。 3.术后72h,假手术组大鼠脑组织含水量为(78.87±0.58)%,模型组大鼠脑组织含水量为(82.15±0.47)%,与假手术组比较,模型组脑组织含水量显著增高(P<0.01):涤痰汤组脑组织含水量为(80.91±0.68)%,与模型组比较显著降低(P<0.01)。 4.术后72h,假手术组大鼠未见梗死脑组织;模型组脑组织梗死范围为(23.42±1.92)%;涤痰汤组脑梗死范围为(20.38±2.02)%,与模型组比较显著降低(P<0.01)。 5.HE染色显示,假手术组大鼠脑组织缺血区的神经细胞、细胞骨架及血管均未见受损。模型组缺血中心区神经元、胶质细胞和血管大量坏死,可见少量皱缩湖北中医学院f吹卜学位论文 涤疾汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的神经保护研究神经元和小胶质细胞,细胞骨架消失或严重破坏。半暗带可见部分缺血变化的皱缩神经元,较多星形胶质细胞和增生的大量小胶质细胞,细胞骨架轻微改变。与模型组比较,涤痰汤组大鼠脑组织缺血区范围明显缩小,受损程度明显减轻。 6.术后72h,免疫组化显示,脑组织中染色呈深棕色的为TNF一。阳性细胞,主要见于受损的神经细胞及部分胶质细胞,假手术组大鼠皮质中正常神经元的胞浆可见TNF一Q少许表达,单位面积阳性细胞数为(6.56士1 .68)个;模型组大鼠缺血侧皮质的神经细胞可见TNF一Q大量表达,单位面积阳性细胞数为(125.07士13.48)个,与假手术组比较显著增高(P<0.01):涤痰汤组大鼠缺血侧皮质中TNF-。的表达显著减少,单位面积阳性细胞数为(105.34士10.66)个,与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。 7.术后72h,流式细胞仪检测发现,假手术组细胞凋亡率为(7 .25士4.38)%;模型组脑组织细胞凋亡率为(37.50士7.36)%,与假手术组比较有显著差异 (P<0 .01);涤痰汤组脑组织的细胞凋亡率为(29.18士4.99)%,明显低于模型组(P<0.05),提示涤痰汤对细胞凋亡有明显抑制作用。结论: 1.通过观察各组大鼠的整体状态、神经功能缺损程度、脑组织含水量、脑梗死范围、病理形态学的改变,表明涤痰汤对大鼠脑缺血再灌注损伤具有神经保护作用。 2.涤痰汤可能是通过抑制大鼠缺血侧脑组织INF一。的表达及细胞凋亡的机制发挥神经保护作用。关键词: 涤痰汤脑缺血再灌注损伤神经保护 肿瘤坏死因子细胞凋亡