【摘 要】
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随着抗生素与生物制剂的过量使用,导致嗜麦芽窄食单胞菌耐药性加重,控制该菌在院内感染的危害是当前亟待解决的问题。通过研究噬菌体的生物学特性与分析其基因组,可为解决嗜麦芽窄食单胞菌多重耐药问题提供理论依据与方法;同时,其裂解酶在防治嗜麦芽窄食单胞菌方面也发挥着重要作用。本研究以嗜麦芽窄食单胞菌No.826为宿主,从医院污水中分离并纯化出噬菌体BUCT598。根据电镜结果,可推断其为短尾噬菌体。当噬菌体
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随着抗生素与生物制剂的过量使用,导致嗜麦芽窄食单胞菌耐药性加重,控制该菌在院内感染的危害是当前亟待解决的问题。通过研究噬菌体的生物学特性与分析其基因组,可为解决嗜麦芽窄食单胞菌多重耐药问题提供理论依据与方法;同时,其裂解酶在防治嗜麦芽窄食单胞菌方面也发挥着重要作用。本研究以嗜麦芽窄食单胞菌No.826为宿主,从医院污水中分离并纯化出噬菌体BUCT598。根据电镜结果,可推断其为短尾噬菌体。当噬菌体以MOI=0.01培养时,测得潜伏期较短,为30 min,爆发量为165PFU/cell。尤为重要的是,噬菌体BUCT598可以在极宽的p H值范围内(p H=1-p H=11)存活,表明出对极酸性和碱性条件具有出色的耐受力。高通量测序结果显示,噬菌体BUCT598基因组结构以线性ds DNA呈现,长度为43,581 bp,GC含量60%。BLASTn比对显示,噬菌体BUCT598与嗜麦芽窄食单胞菌噬菌体BUCT609在基因组序列上有52%的覆盖度,76.40%的相似度。同时,RAST工具预测出其编码55个ORF,其中编码功能蛋白的ORF有24个,其余ORF均编码假想蛋白,没有发现任何编码细菌毒力和抗生素耐药的基因。重组质粒Lysorf6-pET28a(+)以同源重组法构建,后转化至BL21(DE3)细胞中。当IPTG的诱导浓度为0.1 m M并16℃诱导20 h后,成功地表达裂解酶蛋白,根据SDS-PAGE结果推断出该蛋白相对分子质量约为23 k Da(含His标签),与预测结果一致。活菌数量变化实验证实裂解酶Lysorf6与对照组相比,可裂解60%外膜受损的嗜麦芽窄食单胞菌No.826。综上所述,本研究于医院污水中分离出一株噬菌体,并将其命名为BUCT598。随后对其基本的生物学特征与基因组特点进行分析,为嗜麦芽窄食单胞菌噬菌体的深入研究提供基础的理论支持。同时,实验证明预测的裂解酶Lysorf6可以裂解外膜受损的嗜麦芽窄食单胞菌No.826,是治疗多重耐药嗜麦芽窄食单胞菌的潜在选择。
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