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仔猪流行性腹泻(PED)是一种高度接触的急性传染病,近年来发病率呈上升趋势,成为规模化猪场常见的疾病,造成了巨大的损失；PED可感染各个日龄的猪,但主要危害仔猪,日龄越小发病越严重,发病仔猪多因脱水而死亡,死亡率可达100%。PEDV是典型的局部感染、黏膜免疫,这就决定了预防PED最有效的方法是进行黏膜疫苗免疫,但目前尚无商业化生产的黏膜疫苗,因此及时正确地诊断该病对养猪产业具有重要意义。本试验从四川遂宁某规模化猪场取得发病仔猪,通过临床解剖、细菌分离鉴定、寄生虫虫卵检查、反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)等实验室诊断方法初步鉴定为PED感染,为在生产实践中PED的诊断提供了一定的依据。现将论文做以下论述：1、细菌的分离鉴定：无菌条件下将发病仔猪的小肠黏膜及小肠内容物取样接种于普通琼脂平板、麦康凯琼脂平板和胰酪胨大豆蛋白琼脂平板,于37℃恒温箱中培养72h,未见有细菌生长,可以初步排除仔猪是由于细菌感染而引起。2、在清洁的载玻片上滴1滴甘油与水的等量混合液,取少量仔猪小肠内容物,用接种环仔细混匀,用镊子去掉大的乳凝块和渣子等,显微镜下观察,未发现有寄生虫虫卵；又经过饱和盐水漂浮法和蒸馏水沉淀法,均未观察到寄生虫虫卵。可以排除寄生虫引起腹泻的可能。3、取小肠及小肠内容物,研磨反复冻融后离心取上清液,根据TaKaRa Trizol RNAiso Plus(Total RNA)提取试剂盒说明书,从上清液中提取病毒RNA,反转录,进行PCR反应,结果得到了预期大小的目的条带；将目的基因胶回收后送相关公司进行测序,结果显示,所得目的基因与Genbank上所公布的PEDV的核酸相似性最高可达到100%,可以判断PEDV阳性,即仔猪感染了PED。4、取小肠及小肠内容物,研磨反复冻融后离心取上清液作为待检测抗原,利用双抗体夹心间接ELISA法进行PEDV检测,经包被、封闭、加样、加酶标二抗、加显色液、加终止液、在酶标仪上读数等步骤,结果为阳性,也可以判断仔猪感染了PED。