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实验目的观察可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen, STAg)和霍乱毒素(cholera toxin, CT)佐剂滴鼻免疫小鼠诱导的黏膜及系统免疫应答及其抗弓形虫感染的能力,探讨STAg 和CT 滴鼻免疫诱导的免疫应答机制,为弓形虫鼻内复合疫苗研制奠定理论基础。实验方法本研究分三部分:第一部分观察STAg 不同剂量滴鼻免疫诱导小鼠的抗弓形虫感染作用,寻找STAg 滴鼻免疫最佳剂量。分别以5μg、10μg、20μg、30μg STAg/只或PBS 滴鼻免疫10 只BALB/c 小鼠2 次,间隔2 周。末次免疫后第14 天用4×10~4个速殖子/只攻击,观察攻击后小鼠健康状况,体重变化及存活率,攻击后第30 天处死小鼠计数脾、脑内速殖子,检测血清IgG、粪便sIgA 抗体及肠上皮内淋巴细胞(intestinal intraepithelial lymphocytes, IEL)数。第二部分观察STAg和CT不同程序滴鼻免疫诱导小鼠的抗弓形虫感染作用,寻找STAg 和CT 滴鼻免疫最佳程序。BALB/c 小鼠60 只,随机分为3 组。用20μg STAg+1μg CT/只分别滴鼻免疫1 次,2 次或3 次,前2次间隔2 周,末次间隔1 周。末次免疫后第14 天用4×10~4个速殖子/只攻击,观察攻击后小鼠健康状况和存活率,攻击后第30 天处死小鼠计数肝、脑内速殖子,检测血清IgG、粪便sIgA 抗体及脾、派伊尔氏结(Peyer’s patches, PP)淋巴细胞数。第三部分观察STAg和CT滴鼻免疫后黏膜和系统免疫应答的变化及其持续时间。20μg STAg+1μg CT/只滴鼻免疫BALB/c 小鼠48 只,PBS 滴鼻为对照组。滴鼻2 次(间隔2 周)后第1、2、3、4、6、8、10、12 周分别处死小鼠。ELISA 法测定血清IgG、粪便sIgA 及鼻咽冲洗液sIgA;称取胸腺、脾脏重量;计数PP 结数目;制备PP 结、脾、IEL 及鼻相关淋巴组织(nasal-associated lymphoid tissue, NALT)和鼻通道(nasal cavity, NC)淋巴细