杜仲雄花功能成分的提取、分离及活性研究

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杜仲雄花是我国宝贵的药材资源,含有丰富的天然活性物质,但是目前国内外关于杜仲雄花的研究较少。本课题采用溶剂萃取、硅胶柱层析、薄层层析、生物活性研究等手段对杜仲雄花进行研究,并对杜仲雄花的药理学作用进行探讨。以期为合理利用杜仲雄花资源提供科学依据。本课题在单因素试验的基础上,通过响应面优化杜仲雄花乙醇、乙酸乙酯、正丁醇提取物和总黄酮的提取工艺,得到最佳提取工艺参数;进而将色谱分离法和镇静催眠、抑菌活性和抗肿瘤活性筛选试验相结合确定其活性部分。试验结果表明:乙醇提取物的最佳提取条件为:提取温度62.81℃,提取时间2.91h,乙醇浓度59.84%;黄酮提取物的最佳提取条件为:提取温度65℃,提取时间2.84h,乙醇浓度59.58%;乙酸乙酯提取物的最佳提取条件为:提取温度50.50℃,提取时间53.14h,液料比10.12∶1;正丁醇提取物的的最佳提取条件为:提取时间26h,提取温度52.98℃,液料比为10.63∶1。杜仲雄花不同极性提取物都具有一定的镇静催眠和抑菌活性,其活性部分为乙酸乙酯、正丁醇提取物和生物碱。水溶性生物碱和脂溶性生物碱均具有良好的镇静催眠活性,均与戊巴比妥钠表现出良好的协同作用;且水溶性生物碱表现出抗惊厥作用。水溶性和脂溶性生物碱对七种供试菌中的炭疽杆菌具有较好的抑制作用,其抑菌圈直径>15mm。脂溶性生物碱体对人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)具有抑制作用,IC50为6.38mg/mL。对杜仲雄花活性部分中的乙酸乙酯和正丁醇提取物进行初步分离,得到乙酸乙酯提取物初分物的抑菌活性的部分为样品1(甲醇10%)和样品2(20%),其对金黄色葡萄球菌、炭疽杆菌和枯草芽孢杆菌具有较好的抑制作用,其抑菌圈直径>15mm,对大肠杆菌和黑曲霉具有一定的抑制作用;正丁醇提取物初分物的抑菌活性部分为样品4(甲醇40%),其对金黄色葡萄球菌和炭疽杆菌抑制作用较强,对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和黑曲霉具有一定的抑制作用。正丁醇提取物初分物的抗肿瘤活性部分为样品1(甲醇10%)和样品6(纯甲含氨),其对人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)和人肝癌细胞(HepG2)具有较好的抑制作用,IC50<0.049g/mL,对正常细胞(PK)增殖的抑制作用较小。
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