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生殖支原体(Mycoplasma genitalium, Mg)是近十年来新被确立的男性非淋菌性尿道炎(NGU)的病原体,在女性中,Mg可能与黏液脓性宫颈炎(MPC)、盆腔炎(PID)等相关。然而,Mg的感染谱尤其是泌尿生殖道外的感染状况尚不明确,有必要进行探索性研究。男男性接触者(Men who have sex with men, MSM)是性传播疾病(STD)的高危人群,其性行为方式决定了病原体在泌尿生殖道外的其他可能部位的感染。Mg基因分型是研究其病因学和流行病学的一种重要手段,mgpB单核苷酸多态性(SNP)方法是目前最为常用的Mg基因分型方法,运用mgpB SNP分型,进行性伴之间以及同一感染者不同解剖部位的基因型分析,了解Mg在性伴间以及人体不同部位的感染规律。随着阿奇霉素等大环内酯类抗生素广泛应用于治疗Mg感染,国外报道临床上已出现对大环内酯类抗生素耐药的Mg菌株,Mg与大环内酯类抗生素耐药性相关的基因突变位于23SrRNA基因V区,研究Mg耐药有助于指导临床用药。本研究运用横断面调查方法结合实验室研究,了解南京及周边地区MSM人群中Mg的流行状况,尤其是泌尿生殖道外的感染状况；应用mgpB SNP基因分型方法对Mg阳性的MSM标本和STD门诊NGU/MPC患者标本进行基因分型研究；对临床治疗失败的Mg阳性男性持续性和复发性尿道炎患者标本进行23SrRNA基因V区基因突变检测。全文共分三章,各章主要内容简述如下：第一部分生殖支原体在男男性接触者不同部位感染状况研究本章旨在了解南京及周边地区部分城市酒吧男男性接触者(MSM)人群生殖支原体和沙眼衣原体(Ct)在尿道、肛管、咽部等不同解剖部位的感染状况,并分析其感染与临床表现的相关性。采用横断面调查方法,对南京及周边城市MSM酒吧活动的人群进行调查和STD病原体检测。共388人接受问卷调查、体检并提供检测标本。Mg在尿道、肛管、咽部的感染率分别为17.2%(95%CI：13.4%to21.0%)、11.8%(95%CI：8.4%to15.2%)和13.5%(95%CI：9.9%to17.1%)。尿道Mg感染与尿拭子涂片中性粒细胞计数(AOR:2.40,95%CI:1.02-5.62).尿道不适症状(AOR：2.22,95%CI：1.09-4.52)的相关性具有统计学意义。肛管Mg感染与近3个月肛管分泌物(AOR：6.06,95%CI：1.59-23.11)具有显著相关性。Ct在肛管部位的感染率为16.0%(95%CI：12.2%to19.8%),明显高于尿道的9.4%(95%CI：6.4%to12.3%)和咽部的0.8%(95%CI：0.1%to1.6%)。尿拭子涂片中性粒细胞计数(AOR：4.66,95%CI：1.80.12.07)和近3个月与男性具有被插入肛交史(AOR:2.27,95%CI:1.14-4.54)分别是尿道和肛管Ct感染的独立相关因素。提示南京及周边地区酒吧MSM人群中尿道、肛管和咽部Mg感染率均较高,Mg感染与尿道及肛管症状具有显著相关性,Ct依然是MSM尿道及肛管部位主要致病菌之一。第二部分生殖支原体基因分型与分子流行病学研究本章旨在了解南京及周边地区Mg的基因分型特征。对第一章筛选出的Mg阳性MSM标本和性病门诊Mg阳性的NGU/MPC患者标本进行mgpB SNP基因分型研究,利用生物信息学软件进行系统进化分析。在220例Mg阳性标本中,共获得46种mgpB SNP基因型别,其中37种为新发现的基因型别。NJ01型和1型是本地区流行的优势型别。在149例MSM标本中,21例同时发生2个解剖部位的感染,其中10例患者在2个部位感染的Mg基因型完全一致,提示Mg可通过口交、肛交等性行为在同性性伴之间传播,造成同一菌株在同一患者不同部位的感染。另外11例不同部位Mg基因型不一致提示其在不同部位同时感染了Mg不同的菌株,多性伴来源的感染以及现况感染对再次感染无免疫保护可能是造成同一患者不同部位感染不同Mg菌株的原因。在3对Mg均阳性的异性性伴患者中,其中2对Mg基因型一致,确认Mg在异性性伴间的性传播。本研究表明南京及周边地区Mg基因型别具有较高的多样性,本地区Mg基因型别分布与国外其他地区具有较大的差异。第三部分生殖支原体对大环内酯类抗生素耐药突变位点研究本章旨在了解南京及周边地区Mg对大环内酯类抗生素的耐药分子机制。对就诊我院STD门诊的91例近期应用过大环内酯类药物治疗的、持续性和复发性尿道炎患者,收集前段尿标本进行Ng、Ct、Mg、Uu等病原体检测,排除同时合并感染Ng、Ct、Uu后,对Mg阳性标本应用套式PCR扩增与大环内酯类抗生素耐药性相关的23S rRNA基因V区片段,扩增产物进行DNA测序,测得序列与美国国立生物信息中心已登录的Mg标准株G37的相应基因序列比对。91例持续性和复发性尿道炎标本中单一Mg感染21例,其中18例标本成功扩增出23S rRNA基因V区片段,除1例未发现基因突变外,其余17例均发现2058和2059位点突变。其中A2059G突变10例,A2058G突变5例,A2058T突变2例。17例发生耐药基因突变的Mg共有9个基因型,耐药基因突变类型与基因型之间无相关性。提示Mg可能是持续性和复发性尿道炎的重要病原体之一,23S rRNA基因V区片段基因突变可能是南京及周边地区Mg对大环内酯类药物耐药性的主要机制。