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第一部分新型抑癌蛋白Nischarin在乳腺癌组织中的表达及与临床病理参数之间的关系 目的：探讨抑癌蛋白Nischarin在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。 方法：免疫组织化学法检测67例乳腺癌和34乳腺癌癌旁标本的Nischarin表达水平;统计学分析其表达水平与患者年龄、T分期、临床分期、ER/PR/HER-2状态等临床参数的相互关系。 结果： 1.Nischarin在乳腺癌组织中和癌旁组织中的表达: Nischarin在乳腺癌组织阳性表达率为34.3％,而癌旁组织中的表达阳性率为61.8%,显著低于癌旁组织(p<0.05); 2.Nischarin与乳腺癌临床病理参数的关系: Nischarin在乳腺癌组织中的表达与年龄、T分期、临床分期表达无相关性(p>0.05),与PR、HER-2表达无相关性(p>0.05);Nischarin表达与ER表达有相关性(p<0.05)。 结论：Nischarin的缺失可能与乳腺癌相关,它的高表达可能在乳腺癌组织中发挥抑癌作用。 第二部分Nischarin对乳腺癌细胞生物学行为的影响 目的：筛选低表达Nischarin的细胞系,构建Nischarin真核表达载体转染已经筛选出的乳腺癌细胞系,探讨Nischarin对乳腺癌细胞生物学行为的影响。 方法：针对不同分化程度、ER/PR/HER2状态的乳腺癌细胞系:T47D、MCF-7、MDA-MB-231和正常乳腺上皮细胞HBL-100,通过RT-PCR和Western-blot和等方法检测Nischarin在mRNA水平和蛋白质水平的表达,筛选出Nischarin低表达的细胞系;构建Nischarin过表达质粒载体pcDNA3.1-Nischarin,以及空白载体,将其经脂质体Lipofectamine?2000转染至筛选好的细胞系中,采用和RT-PCR和Western-blot等方法检测转染后其细胞Nischarin在mRNA水平和蛋白水平的表达,Transwell侵袭小室模型测定细胞体外侵袭能力,流式细胞仪检测转染前后细胞凋亡情况。 结果：通过筛选MDA-MB-231细胞系Nischarin表达最低,正常乳腺细胞HBL-100表达最高;Nischarin质粒表达载体构建经测序鉴定后构建成功;和RT-PCR和Western-blot方法检测转染后MDA-MB-231细胞NischarinmRNA及蛋白表达水平较空白组、空载体组表达水平高(p<0.05);Transwell侵袭小室模型了解MDA-MB-231细胞体外侵袭能力,转染组较空白组及空载体组侵袭能力减弱;空载体组、空白组和实验组穿过小室的细胞数为252±34.59,244±31.0,181±17.62,三组有统计学差异(p<0.05),空载组与实验组之间及空白组与实验组之间均有统计学差异(p<0.05),流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡率,空白组早期凋亡率和晚期凋亡率分别为(UR1.47%,LR1.68%);空载组:(UR1.58%,LR1.10%);实验组:(UR2.51%,LR8.22%);统计分析组间比较:通过T检验,实验组和空白组,实验组和空载组比较均有统计学差异(p<0.05)。 结论：Nischarin抑制肿瘤细胞侵袭和迁移而促进肿瘤细胞凋亡,具有抑癌作用。