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恶性黑色素瘤(malignant melanoma,MM)是最具侵袭性的肿瘤之一,死亡率占皮肤恶性肿瘤第1位。MM在白种人群中发病率较高,不过近年来我国该病发病率在成倍增加,大约每年新发2万病例。因MM转移早且范围广、晚期转移性MM的中位生存期短的特点在临床治疗上颇为棘手。目前,随着对MM病因的不断深入研究,已经有部分分子靶向药物批准上市。但寻找新的靶点和有效的治疗药物仍然刻不容缓。研究发现,在一些原发性黑素瘤和恶性黑素瘤细胞系中,如:A375细胞系,Abl激酶被高度激活,且Abl激酶的活化与多种肿瘤的发生和发展有关。作为Abl激酶抑制剂的STI-571能逆转一些肿瘤细胞的耐药性,且对乳腺癌细胞、神经母细胞瘤细胞具有抑制增殖的作用,不过其对A375细胞增殖和凋亡的影响及相关信号转导机制还未见报道。故本研究拟从STI-571对A375细胞增殖和凋亡的影响及相关机制方面开展研究。研究目的:通过研究STI-571对A375细胞增殖和凋亡的影响以及相关机制,可为深入研究高活性Abl激酶在MM细胞中作用机制及为STI-571进入临床治疗MM提供理论依据。研究方法:采用CCK8法、平板克隆形成实验,研究不同浓度的STI-571对A375细胞细胞活力的影响;采用流式细胞术和Western-blot方法检测STI-571对A375细胞周期的影响及对细胞内周期相关蛋白p27和SKP2水平的影响;利用核浆蛋白分离和免疫荧光方法检测STI-571对p27在细胞质和细胞核分布的影响。采用流式细胞术、DAPI染色法和Western-blot方法检测STI-571对A375细胞凋亡及细胞内凋亡指示蛋白clevead-caspase3和clevead-PARP含量的影响。利用实时定量PCR法检测STI-571对PTEN的mRNA表达的影响;采用Western-blot方法检测STI-571在蛋白水平对PTEN的调控及对PTEN下游分子AKT活化的影响,同时通过免疫共沉淀实验研究p-AKT与p27之间的关系。实验结果:实验发现,STI-571能抑制A375细胞的活力,并呈现浓度依赖性;STI-571能增加细胞内细胞周期负调控蛋白p27的含量并使其核分布增加(但并不影响SKP2的含量),从而引发A375细胞G1期阻滞。另外,STI-571能显著增强caspase3的活化,促使A375细胞发生凋亡。最后,实验发现STI-571能通过促进A375细胞内PTEN的表达而抑制AKT的活化,并进一步证实p-AKT与p27位于同一个信号通路。实验结论:(1)STI-571能抑制A375细胞增殖,促进A375细胞凋亡。(2)STI-571可通过上调A375细胞内PTEN的表达,抑制PI3K/AKT信号通路,从而发挥对A375细胞的抑增殖和促凋亡的作用。