HIF-1α及下游VEGF对CML细胞增殖的影响及T315I突变CML的协同治疗策略

来源 :苏州大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:kkai365
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
第一部分缺氧状态下HIF-1α对慢性髓细胞白血病细胞增殖作用的研究目的本实验通过采集慢性髓细胞白血病病人骨髓标本和健康志愿者骨髓标本,检测HIF-1α的表达水平,了解病人骨髓中HIF-1αm RNA表达水平与健康志愿者间的差异。并尝试分析HIF-1α基因对慢性髓细胞白血病细胞增殖作用的影响和可能的作用机制。方法通过实时定量RT-PCR方法检测慢性髓细胞白血病病人和相对正常病人骨髓标本中HIF-1α的m RNA表达水平差异。通过RT-PCR法确认K562细胞系中HIF-1α被Si RNA沉默。通过CCK-8法测定沉默HIF-1α后的K562细胞系的增殖和集落形成能力。通过RT-PCR法检测沉默HIF-1α后的K562细胞系中p21、p53的m RNA水平,通过westernblot法检测沉默HIF-1α后的K562细胞系中p21、p53蛋白的表达水平。结果1慢性髓细胞白血病病人骨髓中HIF-1αm RNA的表达水平显著高于对照组,存在显著的统计学意义(P<0.05)。2沉默K562细胞中的HIF-1α能显著抑制K562细胞系的增殖能力,存在显著的统计学意义(P<0.05)。3沉默K562细胞中的HIF-1α能显著抑制K562细胞系的集落形成能力,存在显著的统计学意义(P<0.05)。4通过沉默K562细胞系的HIF-1α基因,该细胞系中p21的m RNA和蛋白表达被显著抑制,而p53的m RNA和蛋白表达未受影响。结论1慢性髓细胞白血病病人骨髓中HIF-1α的表达水平显著高于正常人。2 HIF-1α通过上调p21的表达可以促进慢性髓细胞白血病细胞的增殖。第二部分缺氧状态下VEGF对慢性髓细胞白血病细胞增殖作用的研究目的探讨慢性髓细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者血清中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达水平及其对细胞增殖的影响。方法采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)定量检测12例CML患者(7例慢性期,5例急变期)血清VEGF水平,体外高、低表达VEGF,利用RT-PCR法检测VEGF转染K562细胞后VEGF m RNA水平,并观察转染后对K562细胞增殖的影响。结果1血清VEGF在慢性髓细胞白血病患者组中的水平为115.8±32.72(ng/L),正常对照组的水平为391.95±91.21(ng/L),差异有统计学意义(P<0.05)。上述结果表明VEGF在CML患者组中表达较高。2检测慢性髓细胞白血病不同临床分期患者的血清VEGF水平,慢性髓细胞白血病慢性期患者的血清VEGF水平为267.4±58.89(ng/L),慢性髓细胞白血病急变期患者的血清VEGF水平为473±51.12(ng/L)。结果显示慢性髓细胞白血病慢性期VEGF水平显著低于急变期患者,差异有统计学意义(P<0.05)。3与对照组相比,K562细胞转染反义核苷酸后,VEGF m RNA水平显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。同时反义核苷酸转染入K562细胞后,随着培养时间的延长,细胞增殖速度与对照组相比明显减慢,差异具有统计学意义(P<0.05),而转染正义核苷酸组,细胞生长速度与对照组比,无显著性差异。提示了低表达VEGF表达水平可以抑制K562细胞的增殖。4在转染反义核苷酸组的细胞中加入外源性的VEGF165后,能部分抵消反义核苷酸抑制K562细胞生长的作用,差异有统计学意义(P<0.05)。进一步提示VEGF对细胞增殖具有促进作用。结论1 VEGF能促进慢性髓细胞白血病细胞系K562细胞的增殖。2 VEGF能帮助监测慢性髓细胞白血病的疗效并预测预后。第三部分T315I突变的慢性髓细胞白血病协同治疗的策略目的设计LBH589+ATO、LBH589+17-AAG、17-AAG+ATO、LBH589+Vx-680四个实验组,将这四组药物两两联合分析其对Ba/F3-P210-T315I的治疗效果并分析它们与单药相比的协同效应。方法采用CCK-8法检测LBH589、ATO、17-AAG、Vx-680单药及LBH589+ATO、LBH589+17-AAG、17-AAG+ATO、LBH589+Vx-680四组联合用药对Ba/F3-P210-T315I、Ba/F3-P210细胞系的增殖抑制作用。通过流式细胞术应用AnnexinⅤ-PI试剂盒检测单药及联合用药对Ba/F3-P210-T315I、Ba/F3-P210细胞系的促凋亡作用。通过westernblot法检测LBH589作用于Ba/F3-P210-T315I细胞系后Aurora激酶的表达水平。结果1 LBH589,ATO,17-AAG,Vx-680单独使用对Ba/F3-P210-T315I细胞均有增殖抑制效应,但是Vx-680的增殖抑制效应最为明显,且抑制率随着药物浓度的增加成指数增长,ATO次之。但四种药物的IC50浓度不同,分别为:LBH589(12 nmol/L),ATO(260 nmol/L),17-AAG(80 nmol/L),Vx-680(48 nmol/L)。2四种药物对Ba/F3-P210细胞也具有增殖抑制效应,但是Vx-680的抑制效率最为明显,且四种药物的IC50浓度也不同,分别为:LBH589(24 nmol/L),ATO(480nmol/L),17-AAG(60 nmol/L),Vx-680(32 nmol/L)。3 LBH589+ATO、LBH589+17-AAG、17-AAG+ATO、LBH589+Vx-680四组联合用药对Ba/F3-P210-T315I细胞系的增殖抑制作用为随着IC50浓度的增加,不同的药物组合体现了不同的抑制效率,其中LBH589+Vx-680的组合增殖抑制作用最佳。4通过Annexin V-PI试剂盒染色及流式细胞仪分析发现,LBH589+Vx-680的促凋亡效率最为明显,余次为LBH589+ATO>ATO+17-AAG>LBH589+17-AAG。5 IC50浓度的LBH589作用于Ba/F3-P210-T315I细胞后Aurora A激酶的表达显著减少,而Aurora B激酶的表达无明显变化。结论1 LBH589、ATO、17-AAG、Vx-680单独使用对Ba/F3-P210-T315I、Ba/F3-P210细胞均有增殖抑制效应。2 LBH589+ATO、LBH589+17-AAG、17-AAG+ATO、LBH589+Vx-680四组联合用药中,LBH589+Vx-680对Ba/F3-P210-T315I细胞的增殖抑制和促凋亡效应最好。3 LBH589+Vx-680对Ba/F3-P210-T315I细胞的增殖抑制和促凋亡效应可能是通过抑制Aurora A激酶实现的。
其他文献
日益凸显的侵犯商标权犯罪对我国商标权法律保护体系发出了挑战。由于特殊的历史文化背景、法律制度及国情,美国的知识产权保护制度走在了世界的前列,将其与我国的商标权刑事
批评语篇分析旨在揭示语言的政治性以及语言与意识形态和权势之间的联系。本文首先介绍了批评语篇分析的理论基础及进行批评语篇分析所依赖的语言学理论及其常用的分析方法。
我国的保险业在近二三十年的发展中,取得了令人瞩目的成就。但与西方成熟的经营管理模式、深厚的保险文化底蕴、专业的保险从业人员、丰富的市场经验相比,我国人身保险业在很
选取6周龄雄性昆明种小鼠40只,按体质量随机分成4组:即对照组(正常日粮),高脂日粮组(粗脂肪含量18%),LA组(高脂日粮+0.05%LA和高脂日粮+0.1%LA)。小鼠预饲1周后正式饲喂,饲喂5周后进行代谢试验
在落后农村地区引进互联网、让农民接触网络信息是我国信息化发展的重要问题。笔者通过对宁夏灵武市白土岗乡的实地调查,得到了农村互联网接入的另一种方式:通过政府支持、利
信访工作中既要防止消极的拒民思维,又要防止过度的迁就思维,因为二者均为"人治"的思维方式。本文认为,信访工作中的法治思维是指:政府要从消极被动的守法者转变为积极主动的
本文运用田野调查法 ,对兰州市伊斯兰教的总体情况及部分宗教活动场所开展了调查 ,内容涉及兰州市伊斯兰教的总体情况、清真寺历史沿革、寺院经济、经堂教育、党的民族宗教政
中国画自进入魏晋南北朝时期,以人物为题材的绘画艺术得到了很大的发展。顾恺之作为本时期具有代表性的艺术家,对后世的写真型绘画艺术作出了巨大的贡献。本文通过对文献和史
随着经济全球化,社会信息化、高速化进程的加快,我国的高等美术教育也面临着多元化方向的选择。本文旨在通过对市场需求及其现状的分析,提醒大众"实用性美术"并非是社会对美
智能移动机器人(在本论文的后续简称移动机器人)是一类能够通过感知环境,实现在环境中运动的机器人系统。移动机器人的导航问题对于移动机器人十分重要,其研究内容是在具有障