目的：通过对脊柱结核患者外周血单个核细胞在1,25-二羟维生素D3(1,25-(OH)2D3)刺激下在结核杆菌卡介苗(BCG)作用后的一氧化氮(NO)浓度、一氧化氮合酶(NOS)及各亚型的含量随1,25-(OH)2D3作用时间及浓度的不同而变化的规律及各组间的差异性分析，以及对诱导型NOS(iNOS)、神经型NOS(nNOS)、上皮型NOS(eNOS)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA．含量的变化情况进行较全面完整、高灵敏度的定性、定量的随机对照、双盲实验，研究1,25-(OH)2D3对脊柱结核患者外周血单个核细胞吞噬结核杆菌的作用，探讨它在脊柱结核患者对结核杆菌的免疫力的影响和作用机制，为脊柱结核的临床治疗的新辅助方法的提出提供理论依据及实验基础。 方法： ①根据实验要求收集脊柱结核患者新鲜外周静脉血标本，采用密度梯度离心法分离单个核细胞，经BCG作用后，随机配对分成实验组及空白对照组，并分别加入不同浓度的1,25-(OH)2D3及等量DMEM培养基培养，并在0、3、6、9、12、15天收集其培养上清液，利用一氧化氮试剂盒测定各组NO相对OD值，分析在不同时间点和不同1,25-(OH)2D3浓度刺激下NO的变化及变化规律；用一氧化氮合酶检测试剂盒测定不同时间点的各组标本(实验组1,25-(OH)2D3终浓度为10-8mol/L)的总NOS和iNOS的含量，分析iNOS和cNOS在各组的时间变化规律。 ②在前述实验的基础上，确定1,25-(OH)2D3作用的最佳时间及与浓度的关系。以同样方法分离得到单个核细胞、分组培养(实验组加入10-8mol/L的1,25-(OH)2D3)；培养6天后，离心收集细胞，Trizol试剂盒提取细胞总RNA，逆转录成cDNA，Real-time PCR扩增，对目的基因iNOS、nNOS、eNOS和TNF-α及参照基因GAPDH的mRNA含量进行分析，以相对定量法即2-△△Ct来比较其差异。琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物。 结果： ①脊柱结核患者外周血单个核细胞在结核杆菌卡介苗作用后，实验组和对照组NO相对OD值在细胞培养第3天逐步升高，到第6天达高峰，以后逐渐下降至基线。实验组与对照组相比，在培养第6天，其NO相对OD值升高明显，差异有统计学意义；在培养第3、9、12天，实验组NO相对OD值也高于对照组，但差异无统计学意义。随着1,25-(OH)2D3浓度的增加，实验组NO相对OD值逐步增加，并与1,25-(OH)2D3呈剂量依赖关系。 ②实验组和对照组iNOS的含量明显高于结构型NOS(eNOS，包括nNOS、eNOS)，cNOS在标本中含量很低，且与培养时间无明显关系；两组中iNOS含量在培养第3天逐步升高，第6天达高峰，以后逐渐下降，且实验组iNOS含量与对照组相比，在培养第6天，其iNOS相对OD值升高明显，差异有统计学意义；在培养第3天、9天、12天，实验组NO相对OD值也高于对照组，但差异无统计学意义。 ③实验组iNOS和TNF-α mRNA的2-△△Ct与对照组相比，差异有统计学意义；但nNOS、eNOS的mRNA表达在两组中无差异。 结论： ①1,25-(OH)2D3可调节脊柱结核患者的免疫功能，增强其外周血单个核细胞对结核杆菌的吞噬力。 ②1,25-(OH)2D3对脊柱结核患者外周血单个核细胞的作用部份是由NO、iNOS和TNF-α参与完成的。 ③本研究为1,25-(OH)2D3有望成为脊柱结核的新的辅助治疗用药提供了实验基础和理论依据。