全水相液滴模板法构建双壁杂化囊及其用于固定化酶载体的研究

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具有中空核-壁结构的胶囊在生物医药、食品、化妆品等领域有着广泛的应用。杂化囊由于壁层结合了有机材料和无机材料的优点,具有良好的可调性和稳定性,并且显示出单种材料不具有的性能,因此更具潜力。本论文以双水相单乳液滴为模板,通过界面竞争反应一步制备双壁杂化囊,该杂化囊可用作固定化酶载体,双壁囊结构强化了酶促反应。借助疏水改性双壁杂化囊,为酶创造了隔室化疏水空间,提高了酶的保存稳定性。在制备和表征杂化囊的部分,作者利用在生物友好的双水相也称全水相(葡聚糖/聚乙二醇)单乳液滴界面定位的凝胶化和仿生矿化竞争反应,一步制得双壁层杂化囊,并研究了双壁杂化囊形成机理。双水相质量比和两相组成是形成中空双壁杂化囊的重要因素,双壁杂化囊各囊壁的厚度可通过尿素和钙离子浓度分别调控。借助双水相的分配特性,使得牛血清白蛋白在液滴內相的包封率维持在80%以上。双壁杂化囊的外壁孔径为7-12 nm,内壁仅为1-2 nm,因此杂化囊能过锁住大分子牛血清白蛋白,而允许小分子罗丹明B自由扩散。这该研究成果有望拓展杂化囊在生物医药、日用化学品和催化等领域的应用。在双壁杂化囊固定化漆酶催化反应研究部分,基于双壁杂化囊温和简单的制作过程,以及囊本身的机械稳定和双壁壳层低的传质阻力,作者将漆酶固定在双壁层杂化囊中,选择漆酶催化ABTS作为模型反应,进行酶催化反应过程强化的研究。由于双壁杂化囊的溶胀率较低,在去离子水中保存150天基本保持完好的形貌,杂化囊具有双重保护能力,在p H为3的强酸溶液和p H为11的强碱溶液中浸泡5天,也能维持球形形貌。双壁杂化囊固定化漆酶循环使用10次后,相对酶活保持在65%,而海藻酸钙胶囊在循环使用5次后发生破裂。并且由于双壁层结构降低了传质阻力,双壁杂化囊的最大反应速率和传质系数都明显高于海藻酸钙囊。该研究为固定化酶催化工业提供了一种绿色通用的固定化方法和优良的载体。在双壁杂化囊提高SOD酶保存稳定性研究部分,因杂化囊海藻酸钙外壁存在大量羟基基团,通过硅烷的改性构建了外壁疏水/内壁亲水的双壁杂化囊用于SOD酶的保存,双壁杂化结构有利于减少改性过程中疏水化试剂对酶的影响。我们研究了改性时间对双壁杂化囊疏水能力以及包封SOD酶活的影响。随着改性时间的延长,双壁杂化囊的疏水性随之升高,当改性时间超过4h后,囊壁疏水性不再改变;而随着改性时间增长,SOD酶活相应下降。在最佳改性时间4h时,SOD酶的相对酶活维持在61%。改性后的疏水杂化囊可有效阻止水分子的浸入,在保存7天之后仍然能维持95.5%的初始酶活力,本研究为酶等生物分子提供了绿色高效保存生物活性的载体平台。
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