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自1980年Spratt首先将腹腔温热化疗（Intraperitoneal Hyperthermic Chemoperfusion，IHCP）应用于临床至今已有20年的历史，初步临床试验报告提示IHCP治疗胃癌浆膜浸润与腹膜转移有一定疗效，但关于温热化疗对不同分化程度胃癌细胞的作用机制，尤其是温热化疗如何诱导不同分化程度胃癌细胞凋亡以及凋亡调控基因在温热化疗过程中如何表达等方面知之甚少。本文旨在对上述问题作一实验性探讨，通过体外细胞学实验和体内动物实验，研究温热化疗诱导不同分化程度胃癌细胞凋亡的程度，并对凋亡调控基因Fas和bcl-2的表达水平进行观察，以进一步了解温热化疗对胃癌细胞的作用机理，为提高温热化疗的临床疗效提供实验数据和理论依据。体外实验部分一、 温热化疗对SGC7901和MKN45的生长抑制作用目的：比较温热化疗对不同分化程度胃癌细胞株的生长抑制作用方法：在体外对不同分化程度的胃癌细胞株SGC7901和MKN45分别实施单纯温热治疗、化疗或温热化疗，应用酸性磷酸酶法比较三种不同治疗方法对同一胃癌细胞株的生长抑制作用，同时比较相同处理方法对不同分化程度胃癌细胞株的生长抑制作用结果：温热化疗对中分化胃癌细胞株SGC7901的生长抑制作用大于低分化胃癌细胞株MKN45二、 温热化疗对SGC7901和MKN45作用的细胞形态学观察及对细胞周期的影响目的：观察不同分化程度胃癌细胞株温热化疗后细胞形态学特征及细胞周期的变化方法：在体外对不同分化程度的两种胃癌细胞株分别实施单纯温热治疗、化疗或温热化疗，用流式细胞仪观察不同疗法对细胞生长周期的影响，比较两种不<WP=6>同分化程度胃癌细胞株生长周期的差异；同时在光学显微镜下和电镜下观察肿瘤细胞形态的变化结果：SGC7901温热化疗后G1、G2期细胞数量明显增多，S期细胞明显减少，呈现凋亡细胞典型的细胞周期改变，而MKN45细胞周期变化不显著；光学显微镜和电镜下SGC7901细胞内见凋亡细胞所具有的大量空泡样改变，MKN45细胞内空泡样改变较少。三、 温热化疗诱导SGC7901和MKN45细胞凋亡的比较目的：比较温热化疗诱导不同分化程度胃癌细胞凋亡的强弱方法：在体外分别对两株不同分化的胃癌细胞株实施单纯治疗和温热化疗，应用TUNEL法测定SGC7901和MKN45各治疗组在不同时段的细胞凋亡率。结果：1. SGC7901和MKN45温热化疗组各时段细胞凋亡率均高于化疗组，有显著的统计学差异。SGC7901温热化疗组48小时和72小时肿瘤细胞凋亡百分数分别为42.38±0.12％和50.17±0.41％，而化疗组分别为30.18±0.61％和43.52±0.34％；MKN45温热化疗组48小时和72小时肿瘤细胞凋亡百分数分别为32.89±0.23％和40.37±0.39％，而化疗组分别为23.86±0.29％和34.55±0.47％。 2. 中分化胃癌细胞SGC7901温热化疗组各时段细胞凋亡率均高于低分化胃癌细胞MKN45，且差别有显著性。四、 温热化疗对凋亡调控基因Fas表达的影响目的：比较温热化疗对不同分化程度胃癌细胞株Fas表达的影响方法：在体外分别对不同分化程度的两株胃癌细胞株实施单纯温热治疗、化疗或温热化疗，收集各治疗组不同时段的细胞，加入CD95PE标记,用流式细胞仪分析Fas基因的表达水平结果：温热化疗后SGC7901的Fas表达水平明显上调，MKN45的Fas表达水平与对照组相比无明显变化，提示SGC7901Fas基因表达的明显上调可能是其细胞凋亡率高于MKN45的重要机制之一。五、 温热化疗对凋亡调控基因bcl-2表达的影响目的：比较温热化疗对不同分化程度胃癌细胞株bcl-2表达的影响。方法：在体外分别对不同分化的两株胃癌细胞株实施单纯温热治疗、化疗或温热化疗，收集不同作用方法和作用时间的两种细胞株，用Western blot方法检测bcl-2蛋白的表达结果：SGC7901和 MKN45的bcl-2基因表达水平均有下调，但以SGC7901更为明显。<WP=7>动物实验部分一、 裸鼠胃癌腹腔内转移模型的建立目的：建立两种不同分化程度胃癌细胞腹腔内转移的裸鼠动物模型方法：分别以1×106、1×107和1×108个SGC7901或MKN45肿瘤悬浮液经裸鼠上腹部小切口或直接腹腔内注射，分别于腹腔内接种后2、3和4周开腹，了解腹腔内肿瘤种植的情况。结果：1×107个SGC7901或MKN45肿瘤细胞经腹腔小切口接种后4周腹腔内形成较为均一的肿瘤转移结节。这一肿瘤细胞接种的浓度及方式优于其他两种细胞浓度制成的模型，较适用于进行腹腔温热化疗的研究。二、 腹腔温热化疗诱导裸鼠腹腔内胃癌转移肿瘤凋亡及其疗效的观察目的：观察腹腔温热化疗诱导裸鼠腹腔内转移肿瘤的凋亡率及其疗效。方法：应用SGC7901和MKN45裸鼠腹腔内转移的动物模型，分别实施腹腔单纯温热治疗、腹腔内化疗和腹腔内温热化疗。游标卡尺测量各组治疗前后腹腔内10个最大肿瘤结节的直径，计算肿瘤结节的增长率，减少50%以上的判定为PR，小于50%～增加25%为NC，增加25%以上的为PD。流式细胞仪测定各组治疗前后肿瘤细胞的凋亡率。结果：SGC7901腹腔内温热化疗组PD 0％，NC 67%，PR 33%；MKN45腹腔内温热化疗组PD 17％，NC 83%，PR 0%。SGC7901腹腔内温热化疗组实体肿瘤细胞的凋亡率为69.31%±0.62%（n＝6）, M