研究背景恶性肿瘤是威胁人类健康的全球重大公众健康问题。世界卫生组织统计报告评估,2018年全球新增恶性肿瘤病例为1810万,其中有960万人死于恶性肿瘤。在最新发布的《2018年全球癌症统计数据》中,肺癌以11.6%的发病率与18.4%的病死率高居全球恶性肿瘤首位。在中国,肺癌亦是发病率与病死率最高的恶性肿瘤。其中,非小细胞肺癌（Non-small cell lung cancer,NSCLC）约占肺癌的80～85%。循环肿瘤细胞（Circulating tumor cells,CTCs）检测是备受关注的“液体活检”技术,并证实其在肺癌、乳腺癌、结直肠癌、前列腺癌等肿瘤的诊断、治疗及预后中有积极的临床应用价值。趋化因子受体（Chemokine receptors）是具有7个穿膜结构区的G蛋白偶联受体,根据其结合配体的不同可分为CCR、CXCR、XCR、CX3CR四个亚族。趋化因子（Chemokines,CKs）与其特异性受体结合,参与了多种肿瘤细胞的粘附、增殖、抗凋亡及血管生成等多个病理、生理过程,并作为调节介质在肿瘤的生成、侵袭与转移中发挥作用,与疾病的不良预后相关。此前的研究发现,CCR9可通过CCR9-CCL25轴调节肺癌细胞基质金属蛋白酶（MMP2、MMP9）及其组织特异性抑制物（TIMP-1、TIMP-2）的表达水平促进肺癌细胞的侵袭与转移,并与患者的预后相关,然而,通过CTC检测CCR9表达水平的研究目前尚未见报道。本研究旨在探讨CTC及其趋化因子受体CCR9与NSCLC的临床相关性,探讨CTC及CCR9在NSCLC肿瘤转移中的临床价值及可能的作用机制。方法1.收集2018年5月～2019年6月就诊于广西壮族自治区人民医院临床肿瘤中心的初治NSCLC患者共62例,采用Canpatrol TMCTC技术检测患者外周血中的CTC及CTC上CCR9表达水平,对CTC及其CCR9表达水平与NSCLC患者临床、病理的关系进行研究,并分析CTC及CCR9与NSCLC的临床相关性。2.构建稳定过表达CCR9的慢病毒LV-CCR9及阴性对照病毒CON335,用慢病毒LV-CCR9及阴性对照病毒CON335感染人非小细胞肺癌A549细胞和PC-9细胞,调节细胞CCR9表达;其中将感染慢病毒LV-CCR9的细胞株OE-A549及OE-PC9作为实验组,实验组中CCR9表达上调;感染阴性对照病毒CON335的细胞株NC-A549及NC-PC9作为对照组,阴性对照病毒CON335对CCR9表达无影响。3.实验组细胞株与对照组细胞株进行细胞功能实验,探讨过表达CCR9对A549细胞和PC-9细胞转移能力的影响。结果1.Canpatrol TMCTC技术检测结果显示:62例NSCLC患者中有56例（90.3%）检测出了CTCs。CTC计数与NSCLC的TNM分期、淋巴结转移、远处转移有相关性（P<0.05）。组间差异性较中,晚期、有远处转移、肿瘤大小为T3-T4的NSCLC患者外周血CTC计数均高于早期、无转移、T1-T2的NSCLC患者（6.98±6.28个/5m L VS 3.13±2.55个/5m L、7.08±6.47个/5m L VS3.83±3.39个/5m L与7.62±7.08个/5m L VS 4.37±3.60个/5m L,P<0.05）。2.在CTC亚型与NSCLC临床相关性分析中,上皮型CTC计数与NSCLC TNM分期及肿瘤远处转移相关（r=0.296与r=0.273,P<0.05）;混合型CTC计数与NSCLC肿瘤转移也具有相关性（r=0.253,P=0.047）。3.在CTC上CCR9表达与NSCLC临床相关性分析中,混合型CTC上CCR9阳性率与NSCLC远处转移相关（r=0.353,P=0.038）。4.细胞划痕及Transwell细胞迁移实验结果显示,过表达CCR9的OE-A549及OE-PC9细胞株迁移能力比对照组NC-A549及NC-PC9细胞株明显增强;体外实验证明,过表达CCR9可促进人非小细胞肺癌A549细胞及PC-9细胞迁徙与转移。结论1.CTC计数与NSCLC的TNM分期、淋巴结转移及远处转移相关。2.体外实验证明CCR9高表达可促进NSCLC细胞迁徙与转移。3.混合型CTC是同时兼备上皮和间质特性的肿瘤细胞,CCR9可能参与了肿瘤细胞上皮-间质化过程（EMT）与混合型CTC的产生,从而促进原发肿瘤的远处转移。4.CTC上CCR9表达有望用作评估NSCLC肿瘤转移风险的生物标志物。