目的:本课题旨在开发一种丙二醇和乙醇的含量低,稳定性良好的奥硝唑注射液,以降低临床副作用的发生率。为此,我们建立无丙二醇且乙醇浓度低的奥硝唑注射液新处方,水分对该处方稳定性的影响小,且在该处方中,奥硝唑的溶解度高、稳定性好。对新处方进行制备工艺优化,再与原研奥硝唑注射液进行对比研究,包括体内和体外药学行为初步研究以及稳定性研究,以期获得稳定、安全和有效的新奥硝唑注射液。方法:1、新奥硝唑注射液处方筛选参考原研和国内奥硝唑注射液的处方,将奥硝唑的溶解体系分为水体系和非水体系。将两种体系的注射液制备后,以注射液的性状、pH和有关物质为评价指标,筛选出更优的奥硝唑溶解体系。建立奥硝唑含量测定的紫外分光光度法,通过测定奥硝唑在不同混合溶剂中吸光度大小,计算出奥硝唑的溶解度,筛选出奥硝唑溶解度最高的混合溶剂,从而达到降低有机溶剂用量的目标;再通过10天高湿实验,测定奥硝唑及其有关物质的含量,考察奥硝唑在不同混合溶剂中的稳定性,筛选出对奥硝唑溶解度大且受水分影响小的最佳混合溶剂。用筛选出的最佳混合溶剂来溶解奥硝唑,配制成不同体积的奥硝唑溶液,在4℃低温下考察各个溶液的物理稳定性,从而确定新奥硝唑注射液的规格体积。2、新奥硝唑注射液制备工艺研究通过LC-MS测定奥硝唑注射液中有关物质的分子量,并参考文献确证有关物质的分子结构,为新奥硝唑注射液制备过程中有关物质的控制提供依据。通过加入不同含量水分到奥硝唑注射液中,测定奥硝唑及其有关物质的含量,考察水分对奥硝唑注射液稳定性影响大小,以此确定水分的控制范围。以pH值、含量和有关物质作为评价指标,对新奥硝唑注射液进行制备工艺优化,包括配液温度、配液后放置时间、活性炭用量、活性炭处理时间和灭菌时间的选择,探究不同制备工艺对奥硝唑注射液稳定性的影响。3、新奥硝唑注射液的稳定性研究与原研奥硝唑注射液对比研究新奥硝唑注射液的稳定性。以性状、pH值、可见异物、含量和有关物质作为稳定性考察项目,通过冻融试验、高温试验、高湿实验、光照试验、加速试验和长期试验,研究两种注射液在稳定性方面的差异。4、新奥硝唑注射液配伍稳定性研究参考原研奥硝唑注射液的给药途径,应用前,首先将注射液进行适当的稀释,然后再静脉滴注。以性状、pH值、可见异物、含量和有关物质作为评价指标,将新奥硝注射液和原研奥硝唑注射液分别与0.9%NaCl注射液、5%葡萄糖注射液和10%葡萄糖注射液进行配伍试验,比较两种注射液的配伍稳定性差异,筛选出最佳配伍溶媒。5、奥硝唑体内和体外药学行为初步研究与原研奥硝唑注射液对比,初步研究新奥硝唑注射液体内和体外的药学行为。通过体外释放试验、溶血与凝聚试验来考察两种注射液的体外药学行为;通过SD大鼠体内药物动力学试验研究两种注射液的体内药学行为。结果:1、确定312nm为测定奥硝唑含量的最大吸收波长,以奥硝唑浓度为横坐标,吸光度为纵坐标进行线性拟合求得回归方程为A=0.0522C-0.0842,R~2=0.9998。系统适应性和重复性试验结果表明该方法可行性良好。与奥硝唑水体系相比,非水体系中奥硝唑含量更高且有关物质含量更低,所以选择非水体系为奥硝唑溶解体系。通过溶解度试验结果发现,四种混合溶剂PEG400/乙醇、PEG600/乙醇、甘油/乙醇和DMAC/乙醇的混合比例分别为3:2、4:1、3:2和3:2时,奥硝唑在该混合溶剂比例下溶解度最高。与其它三种混合溶剂相比,奥硝唑在混合比例为3:2的PEG400/乙醇溶剂中溶解度最高。通过高湿试验结果发现,与其它三种混合溶剂相比,在PEG400/乙醇混合溶剂中奥硝唑的杂质含量最低且无明显增长,说明奥硝唑在PEG400/乙醇混合溶剂中稳定性最好。综合溶解度试验和高湿试验结果,选择混合比例为3:2的PEG400/乙醇为新奥硝唑注射液的最佳混合溶剂。参考原研奥硝唑注射液规格（3m L:0.5g）,固定奥硝唑的量为0.5g,将奥硝唑的PEG400/乙醇溶液体积配制成1.5m L时,溶液的物理稳定性良好。因此,选择新奥硝唑注射液的规格体积为1.5m L。2、通过LC-MS可以确证奥硝唑注射液中三个有关物质的分子结构,分别是2-甲基-5-硝基咪唑、1-（2’,3’-二羟基丙基）-2-甲基-5-硝基咪唑、1-（2’,3’-环氧丙基）2-甲基-5-硝基咪唑。随着处方中的水分含量增加,自制制剂和原研制剂的杂质含量都会增加,但自制样品的杂质含量和杂质增长速率均低于原研样品,因此,自制制剂比原研制剂受水分的影响小且更稳定。配液过程中引入微量水分的试验结果表明,将水分含量控制到1%以内,新奥硝唑注射液稳定性良好。以溶解时间、主药含量和有关物质为评价指标,筛选出配液温度为40℃,且在配液8h内溶液稳定。以pH值和主药含量为评价指标,筛选出活性炭用量为0.1%和活性炭处理时间为15min。以pH值、主药含量和有关物质为评价指标,筛选出灭菌时间为15min。3、对比研究新奥硝唑注射液和原研奥硝唑注射液的稳定性,两种注射液在低温冻融、光照、加速和长期实验中稳定性良好。在高温条件下,两种注射液的有关物质略有增长。在高湿10天后,新奥硝唑注射液和原研奥硝唑注射液的总杂含量分别增至0.012%和0.190%,新奥硝唑注射液的稳定性更好。4、新奥硝唑注射液和原研奥硝唑注射液分别与0.9%氯化钠注射液、5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液配伍后,溶液的性状、可见异物、奥硝唑含量和有关物质均符合规定,且pH值稳定。5、体外释放试验结果表明,两种奥硝唑注射液的体外释放曲线相似,且在较短时间内都能完全释放。体外溶血与凝聚试验结果显示,在3h内未观察到溶血和凝聚现象发生,说明了自制奥硝唑注射液安全性良好。对检测血浆样品中奥硝唑含量的HPLC分析方法进行了方法学验证,专属性、线性、准确度和精密度均符合生物样品分析方法的要求。原研和自制奥硝唑注射液的消除半衰期t1/2分别为1.53±0.05h和1.85±0.08h、平均驻留时间MRT0-t分别为1.98±0.16和2.55±0.18h、血药浓度-时间曲线下的面积AUC0-∞分别为31.81±3.67μg*h/m L和42.33±2.58μg*h/m L、清除率CL分别为0.63±0.06和0.47±0.03L/h/kg、表观分布容积V分别为1.39±0.15L/kg和1.26±0.12L/kg。结论:针对原研奥硝唑注射液的稳定性受水分影响大和有机溶剂用量大带来的一系列临床安全性问题,通过处方筛选和制备工艺优化,得到了比原研奥硝唑注射液对奥硝唑溶解性更好、有机溶剂用量少、受水分影响小的新奥硝唑注射液;通过稳定性试验,表明了该注射液比原研奥硝唑注射液更稳定;新奥硝唑注射液在体外无溶血与凝聚现象,在体外释放情况与原研奥硝唑注射液相似;相比于原研奥硝唑注射液,给大鼠注射新奥硝唑注射液后,在血浆中奥硝唑浓度高且不易被清除,在体内滞留时间长,可以延长奥硝唑在体内的作用时间,能更好地发挥药效。因此,新奥硝唑注射液拥有稳定性良好、有机溶剂用量少、体内作用持久的优势和降低临床副作用的潜力。