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目的:应用羟基脲(HU)和阿霉素(ADM)诱导乳腺癌细胞系DNA损伤,探讨RB和P53在乳腺癌DNA损伤以及上皮间质性转化(EMT)中的作用,从而探索RB-P53调控网络在乳腺癌进展和转移中的调控机制。方法:使用HU和ADM两种药物分别诱导乳腺癌细胞系(MCF-7、SKBR3、MDA-MB468)DNA损伤,应用Western blot技术检测RB和P53的表达情况,分别应用流式细胞技术和MTT技术检测细胞周期和细胞增殖活力;然后采用转染技术敲低MCF-7细胞系RB的表达,检测HU和ADM作用前后RB和P53的表达情况以及细胞周期和细胞增殖活力;最后分别抑制MCF-7(表达野生型P53wt)、MCF-10A(表达野生型P53wt)和SKBR3(表达突变型P53mt)细胞系中RB/P53的表达,应用RT-PCR技术和Western blot技术检测RB、P53和EMT相关标志蛋白(如E-cadherin和snail)的表达水平。结果:HU作用于三种乳腺癌细胞系(MCF-7、SKBR3和MDA-MB-468)均诱导了G1/S期阻滞,HU作用于MCF-7使P53wt和RB表达上调,HU作用于MDA-MB-468后P53mt表达变化不显著,HU作用于SKBR3后P53mt表达下调而RB表达上调,说明突变型P53失去了监控细胞周期的功能;HU洗脱后,MCF-7和SKBR3细胞周期阻滞状态较HU洗脱前变化不显著,而MDA-MB-468由HU洗脱前的G1/S期阻滞转变为HU洗脱后的G2/M期阻滞。HU和ADM均可以抑制MCF-7细胞系增殖,并且敲低RB可以降低其抑制细胞增殖的作用;敲低RB可使三个细胞系(MCF-7、MCF10A和SKBR3)的P53表达水平均降低,也可以促使HU诱导的MCF-7细胞周期阻滞状态由G1/S期阻滞转变为G2/M期阻滞以及ADM诱导的G2/M期阻滞更加明显。在MCF-7细胞中,敲低RB或P53均可下调E-cadherin表达和上调snail表达,RB和P53双敲低可引起E-cadherin表达水平的进一步降低和snail表达水平的进一步升高,在正常乳腺上皮细胞MCF10A中,结果与MCF-7类似,而SKBR3细胞E-cadherin表达缺失,P53为突变型,敲低RB可引起snail表达水平明显升高。结论:在乳腺癌细胞系中,RB和P53wt都参与调控HU和ADM诱导的DNA损伤,且彼此相互依赖,此外,RB还参与调控G2/M期,具体机制有待进一步研究;当RB表达水平下降时,P53wt表达水平随之下调,乳腺癌细胞系发生了EMT,且对HU和ADM的敏感性均下降,P53wt表达水平下降也可诱导乳腺癌细胞系发生EMT,而同时下调RB和P53wt的表达可使乳腺癌细胞系发生更加明显的EMT,这为临床乳腺癌病人的治疗提供了新思路,或许可以通过检测肿瘤组织中RB和P53wt的表达水平判断病人对DNA损伤类化疗药的敏感性以及发生远处转移的风险;因此,RB-P53调控网络参与调控乳腺癌进展和转移,进一步研究该调控网络可为乳腺癌的诊治提供更多依据。