论文部分内容阅读
第一部分哮喘小鼠气道重塑模型的制备目的:制备哮喘小鼠气道重塑模型。方法:将清洁级雌性BALB/c纯系小鼠30只,随机分成正常对照组、哮喘组和咪喹莫特组,每组10只。于第0、14天以卵白蛋白（OVA）致敏,第24天雾化吸入1%OVA激发并持续28d,建立哮喘气道重塑模型;咪喹莫特组在吸入OVA前2h雾化吸入咪喹莫特30分钟;正常对照组以生理盐水代替OVA。观察3组小鼠气道反应性,气道病理学改变。结果:①各组小鼠的基础呼气阻力（Re）无差异（P＞0.05）,对生理盐水激发无明显反应;注射乙酰胆碱（Ach）进行激发时,各组小鼠Re随Ach浓度升高而升高,哮喘组高于对照组（P＜0.05）,咪喹莫特组Re低于哮喘组（P＜0.05）,但略高于对照组;当Ach浓度为135ug/kg、405ug/kg时,哮喘组与对照组存在明显差异（均有P＜0.05）。②哮喘组小鼠气道壁明显增厚,杯状细胞增生,伴黏液高分泌,胶原过度沉积,管壁面积/支气管管腔的内周长（WAt/Pi）,支气管平滑肌面积/管腔的内周长（WAm/Pi）,支气管平滑肌细胞核数/管腔的内周长（N/Pi）明显增加,与对照组比较差异有统计学意义（均有P＜0.05）。结论:本试验成功制备了哮喘小鼠气道重塑模型,为进行下一步研究奠定了基础。第二部分咪喹莫特对哮喘小鼠气道重塑的影响及机制目的:观察咪喹莫特对哮喘小鼠气道重塑和肺组织转化生长因子β1（TGF-β1）及其信号转导分子Smads表达的影响。方法:建立哮喘气道重塑模型,自第14天雾化吸入OVA前2h,干预组分别雾化吸入布地奈德或咪喹莫特30分钟。正常对照组以生理盐水代替OVA。最后一次雾化结束后24h,对肺组织切片行苏木精-伊红（HE）染色观察病理学改变、过碘酸雪夫（AB-PAS）染色定量杯状细胞百分比及黏液分泌、马宋氏三色（Masson）染色测定胶原沉积;运用医学图像分析软件测定WAt/Pi、WAm/Pi、N/Pi;用免疫组化法检测肺组织TGF-β1的蛋白表达;用逆转录-聚合酶链反应检测肺组织TGF-β1mRNA以及Smad2,Smad7 mRNA表达。结果:①哮喘组小鼠杯状细胞增生明显,伴黏液高分泌,气管壁胶原过度沉积,WAt/Pi、WAm/Pi、N/Pi增高,与对照组比较差异有统计学意义（均有P＜0.05）;咪喹莫特组杯状细胞轻度增生,黏液分泌减少,气管壁胶原沉积减轻,WAt/Pi、WAm/Pi、N/Pi下降,与哮喘组比较差异有统计学意义（均有P＜0.05）。②哮喘组TGF-β1蛋白和mRNA、Smad2mRNA的表达较对照组增加,差异有统计学意义（P＜0.05）,咪喹莫特组TGF-β1蛋白和mRNA、Smad2mRNA的表达下降,与哮喘组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）;哮喘组Smad7mRNA的表达较对照组下降（P＜0.05）,咪喹莫特可显著上调Smad7mRNA的表达,与哮喘组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:早期雾化吸入咪喹莫特通过抑制慢性哮喘小鼠肺组织TGF-β1蛋白和mRNA、Smad2mRNA的过度表达,上调Smad7mRNA的表达,阻断TGF-β1的胞内信号转导通路,从而抑制气道杯状细胞和平滑肌细胞的增生,可在一定程度上减轻哮喘小鼠的气道重塑和气道炎症。