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目的:血管性痴呆（vascular dementia, VD）指脑血管病变引起的脑损害所致的痴呆。是在Alzheimer病（AD）之后第二常见的痴呆。发病机制一般认为是脑血管病的病灶涉及额叶、颞叶及边缘系统，或病灶损害了足够容量的脑组织，导致高级认知功能的严重受损。目前对于VD的分子机制研究已日渐成为科学家们研究的热点问题。主要有兴奋性氨基酸毒性、胆碱能缺陷、自由基损伤、炎症反应、神经细胞凋亡等。近年来，神经细胞凋亡与VD的关系越来越受到科学家们的关注。c-Jun氨基末端激酶（JNK）又称应激激活蛋白激酶（SAPK），是丝裂原激活的蛋白激酶（MAPKs）超家族的一员。大量实验提示，JNK信号通路在细胞增殖、细胞凋亡、氧化应激及多种人类疾病的发生发展中扮演着重要角色。已有研究表明，应用特异性JNK抑制剂可有效地阻断JNK信号通路从而有效地调控细胞凋亡。普罗布考是一种非他汀类血脂调节药物。目前国内外研究表明，普罗布考在AD大鼠中具有显著的脑保护作用，而其在VD中的治疗鲜有报道。本实验通过观察VD大鼠海马组织神经细胞的凋亡情况及JNK及P-JNK水平的变化，探讨JNK信号通路在VD中的作用及普罗布考对VD大鼠的脑保护作用机制，为VD的临床治疗及普罗布考的临床应用提供依据。方法：选取健康雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠，随机分为假手术组、模型组、普罗布考组，每组10只，采用永久性结扎双侧颈总动脉的方法建立血管性痴呆大鼠模型。普罗布考组灌胃给予普罗布考500mg/kg/d，假手术组和模型组给予等量溶剂。给药8周后，行Morris水迷宫实验，对各组大鼠学习记忆能力进行测试，行为学测试完毕后取材，采用流式细胞术评估海马区神经细胞凋亡程度，用免疫组织化学方法和免疫印迹法（westernblot）测定海马区JNK和p-JNK蛋白的表达水平。结果：1行为学测定1.1逃避潜伏期结果水迷宫定位航行实验表明，从训练的第2天开始至结束，三组大鼠逃避潜伏期均有下降的趋势，说明训练可以增强学习能力。各组大鼠间学习记忆能力存在差异（F=15.34，P＜0.05），与假手术组相比，模型组与普罗布考组大鼠第1-4天的逃避潜伏期时间均明显延长（P＜0.05）；与模型组相比，普罗布考组大鼠第2-4天的逃避潜伏期时间明显缩短（P＜0.05），第1天无显著差异（P＞0.05）。1.2穿越平台次数结果第5天测定的穿越平台次数表示大鼠的空间记忆能力，穿越平台次数越多记忆能力越强。与假手术组相比，模型组大鼠穿越平台次数明显减少（P＜0.05）；与模型组相比，普罗布考组大鼠穿越平台次数明显增多（P＜0.05）；普罗布考组与假手术组相比，大鼠穿越平台次数无显著差异（P＞0.05）。各组大鼠随着训练时间的推移，训练次数的增多，寻找平台的方式在不断变化，寻找平台的时间都在缩短，说明学习锻炼可以增强空间记忆能力。2普罗布考对大鼠海马CA1区神经细胞凋亡的影响流式细胞术细胞周期定量分析表明，假手术组未见明显的凋亡峰，虽也有自发性细胞凋亡发生，但细胞凋亡百分率很低，仅为（5.06±2.52）%；模型组细胞凋亡率为（11.27±2.67）%，较假手术组显著增高（P＜0.05）；普罗布考组细胞凋亡率为（6.57±1.47）%，较模型组显著降低（P＜0.05）；普罗布考组与假手术组相比较虽然也有一定程度的增高，但无统计学意义（P＞0.05）。3普罗布考对大鼠海马CA1区JNK及p-JNK蛋白表达结果的影响3.1免疫组织化学染色结果大鼠海马CA1区p-JNK、JNK蛋白表达的阳性细胞情况：假手术组和普罗布考组大鼠海马区仅见很少的p-JNK阳性神经元。模型组部分海马细胞体积缩小，细胞带不连贯，可见较多的p-JNK阳性神经元。模型组与假手术组相比，模型组大鼠海马CA1区p-JNK蛋白表达的阳性细胞数明显增多（P﹤0.05）；与模型组相比，普罗布考组大鼠海马CA1区p-JNK蛋白表达的阳性细胞数明显减少（P﹤0.05）；普罗布考组与假手术组相比，大鼠海马CA1区p-JNK蛋白表达的阳性细胞数无明显差异（P＞0.05）。三组间比较，JNK蛋白表达的阳性细胞数均无明显差异（F=0.54，P＞0.05）。3.2western blot结果大鼠海马p-JNK、JNK蛋白的表达水平情况：模型组与假手术组相比，模型组大鼠海马区p-JNK蛋白表达水平明显增高（P＜0.05）；普罗布考组与模型组相比，普罗布考组大鼠海马区p-JNK蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）；普罗布考组与假手术组相比，大鼠海马区p-JNK蛋白的表达水平也有差异，普罗布考组显著高于假手术组（P＜0.05）。三组间比较，大鼠海马区JNK蛋白的表达水平均无明显差异（P＞0.05）。三组间p-JNK/JNK值的比较:模型组与假手术组相比，模型组大鼠海马区p-JNK/JNK值明显增高（P＜0.05）；普罗布考组与模型组相比，普罗布考组大鼠海马区p-JNK/JNK值明显降低（P＜0.05）；普罗布考组与假手术组相比，大鼠海马区p-JNK/JNK值略增高，但差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:1.普罗布考可以减轻VD大鼠海马区神经元凋亡，改善其学习记忆能力。2.VD大鼠海马区p-JNK/JNK值明显增加，说明JNK信号通路参与了VD的发病过程。3.普罗布考可以降低VD大鼠海马区p-JNK/JNK值，提示抑制氧化应激所致的凋亡可能是普罗布考改善VD大鼠空间学习记忆障碍的作用机制之一。