茶氨酸(Theanine)又名L-茶氨酸、N-乙基-L-谷氨酰胺,为一种非蛋白质氨基酸,是绿茶中的一种天然氨基酸,天然存在的茶氨酸以L型为主,仅以游离形式存在。茶氨酸可以从茶叶中提取,又可以通过多种人工合成方法获得。茶氨酸为水溶性氨基酸,极易溶于水而不溶于乙醇或乙醚,在肠道吸收后需要依赖钠离子转运体转运入血,并可以通过亮氨酸转运系统跨过血脑屏障转运进入脑部。有研究表明,茶氨酸毒性作用非常小。临床研究发现,茶氨酸可参与调节人体内多个系统的调节,并对神经系统具有保护作用。茶氨酸与谷氨酸结构类似,它可能与谷氨酸竞争性结合谷氨酸受体,参与调节了神经系统的发育。神经干细胞(neural stem cells, NSCs)是干细胞的一种,是存在于脑和脊髓中的未分化细胞。与其他干细胞一样,神经干细胞也具有分裂增殖和多样分化的特点,具备自我更新能力。它能够分化为神经元、神经胶质细胞等多种类型的神经组织细胞。神经干细胞的各种功能是通过神经元和神经胶质细胞共同完成的,当中枢神经系统中的许多疾病,如：脑损伤、脑出血、帕金森病等都存在不同程度的神经细胞缺失或变形死亡,并由此引起神经功能的损害,神经干细胞就可以分化出新的神经元来代替受损的神经元以修复大脑。但是,茶氨酸对损伤大脑中的神经干细胞有没有作用,或是有何种作用,至今尚未见到报道。因此我们在体外分离的NSCs中加入茶氨酸,采用MTS、免疫荧光、RT-PCR、Westen blot等技术方法,研究茶氨酸对体外分离NSCs可能发挥的作用。1. NSCs的分离、培养和鉴定NSCs体外分离、培养取决于多反面因素,如：动物种属、年龄、取材部位、接种密度、培养基营养条件等。研究发现,胚胎鼠相比于新生鼠和成年鼠,其脑皮质中的NSCs含量最高,且具有更高的扩增及分化能力。我们从12.5d的昆明胎鼠大脑中分离NSCs并培养,机械吹打结合200目钢网过滤获取细胞悬液,接种于无血清的神经干细胞培养基。应用Brdu标记及Nestin免疫荧光染色技术检测其增值能力。应用微管相关蛋白2 (microtubule associated protein 2, MAP2)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫荧光染色检测其分化能力。结果显示我们体外分离、培养的NSCs具备较好的自然增值和分化能力,可用于后续的实验研究。2.茶氨酸对NSCs增值和分化的影响用MTS法检测不同浓度茶氨酸对NSCs细胞活性的影响,从而选择最佳给药浓度,实验设置0、1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L、1mmol/L、10mmol/L六个浓度,结果显示MTS法检测不同浓度的茶氨酸对NSCs活性的影响不同,呈现一定的剂量依赖趋势,100μmol/L浓度的茶氨酸作用最为明显,所以我们选择100μmol/L茶氨酸的浓度作为后续实验的药物浓度。然后将培养的NSCs分为两部分,每部分分为2组：对照组和加药组(茶氨酸最终加药浓度为100μmol/L)用于检测增殖能力的NSCs加入无血清培养基(茶氨酸浓度为100μmol/L),培养48h培养后进行BrdU染色,用于检测分化能力的NSCs加入分化培养基(茶氨酸浓度为100μmol/L),培养5d后进行MAP2和GFAP免疫荧光染色,染色后计数阳性细胞,并进行统计学分析,并利用RT-PCR以及Westen blot检测MAP2和GFAP表达。结论：100μmol/L茶氨酸处理组MTS检测的吸光度值显著增高(P<0.05)；加药组BrdU阳性细胞比率、MAP2阳性细胞比率明显高于对照组(P<0.05),两组GFAP阳性细胞比率无统计学差异；加药组MAP2表达显明高于对照组(P<0.05),两组GFAP表达无统计学差异。茶氨酸可促进NSCs增殖及其向神经元方向分化。