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目的:研究建立定量检测慢性粒细胞白血病(CML)融合基因(bcr/abl)的方法,从而探讨其对有融合基因白血病微小残留病变(MRD)的检测,给临床白血病治疗、疗效及预后判断提供依据。
方法:用K562细胞株进行bcr/abl融合基因实时定量检测方法学的建立并形成稳定的试验条件,对临床CML病人不同时期骨髓标本进行检测,探索该融合基因转录本的高低与疾病状态、疗效及疾病转归的关系,为建立稳定、可靠的评价白血病微小残留病变(MRD)的方法提供客观依据,形成一种临床可用的检测方法。
结果:实验结果表明,RQ-PCR最大灵敏度能达到10<1>/u l拷贝数,10<2>-10<8>/ul拷贝数的重复性良好;模板浓度与CT值的相关性均值为0.998;用此体系对K562细胞cDNA的梯度稀释检测可达10<-5>,正常对照无任何扩增<[29]>。慢性粒细胞白血病(CML)病人(除三例骨髓移植病人)bcr/abl基因表达阳性率为96.77%(30/31),与文献报道基本一致。34例病人bcr/abl的Ct值为15.07—39.12(中位数33.02),拷贝数绝对值为0.5×10<2>—7.94×10<7>拷贝/50ng(中位数2.33×10<4>);慢性期病人17例,阳性13例bcr/abl的CT值均值为37.14;初治病人、急变和加速期病人14例bcr/abl的CT值均值为26.43,两者有显著性差异(P<0.05),提示bcr/abl融合基因水平的增高可能预示着疾病的复发或者进入加速、急变期。3例异基因骨髓移植患者染色体都恢复正常核型,bcr/abl均为阴性。本组病人Ph染色体阳性率87.88%(29/33),有4例病人为染色体阴性而bcr/abl融合基因阳性。
结论:本实验应用RQ-PCR检测了34例不同时期CML的骨髓bcr/abl融合基因,结果为加速期和急性期比慢性期病人的bcr/abl转录本明显增高,治疗后bcr/abl转录本会有明显下降,提示bcr/abl的变化与CML的复发、进展和治疗效果有明显相关性。3例骨髓移植后病人bcr/abl检测结果阴性,与文献报道是一致的。与细胞遗传学相比实时定量PCR方法显示出其更加敏感更能早期发现复发的优越性,在对CML病人的诊断和治疗监测中,宜将RQ-PCR和细胞遗传学相结合。