【摘 要】
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Wolbachia作为世界上分布最为广泛的共生菌之一,其感染埃及伊蚊(Aedes aegypti)后可赋予宿主产生抗病毒特性。虽然文献证实Wolbachia可以激活蚊体免疫通路从而抑制登革病毒、寨卡病毒等多种蚊媒病毒的复制,但是关于Wolbachia调控免疫通路的具体分子机制尚未完全探明。本研究旨在探明Wolbachia对埃及伊蚊细胞中micro RNA(mi RNA)表达谱的调控并探究其调控的差
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Wolbachia作为世界上分布最为广泛的共生菌之一,其感染埃及伊蚊(Aedes aegypti)后可赋予宿主产生抗病毒特性。虽然文献证实Wolbachia可以激活蚊体免疫通路从而抑制登革病毒、寨卡病毒等多种蚊媒病毒的复制,但是关于Wolbachia调控免疫通路的具体分子机制尚未完全探明。本研究旨在探明Wolbachia对埃及伊蚊细胞中micro RNA(mi RNA)表达谱的调控并探究其调控的差异表达mi RNA对埃及伊蚊细胞免疫通路及代谢途径的影响。本研究通过下一代测序技术(Next-generation sequencing,NGS)分别测定野生型埃及伊蚊细胞(Aag2)及感染w Alb B型Wolbachia的埃及伊蚊细胞(W-Aag2)中mi RNA表达谱。mi RNA测序共检测到已知mi RNA 151个。相比于Aag2细胞,W-Aag2细胞中上调mi RNA25条,下调mi RNA 30条。通过对差异表达的mi RNA进行靶基因预测,共筛选出11条差异表达的mi RNA可能靶向免疫通路及能量代谢途径,其中Wolbachia感染后显著下调的mi R-34-5p及显著上调的mi R-980-5p可同时靶向多个免疫通路及呼吸链途径相关基因。为了探究Wolbachia是否可利用mi R-34-5p和mi R-980-5p靶向调控免疫基因和呼吸链基因的表达,本研究通过mi RNA功能实验,在埃及伊蚊细胞中分别转染mi R-34-5p和mi R-980-5p的模拟物(mi RNA mimics)及抑制物(mi RNA inhibitors)后,检测靶基因m RNA的表达量变化。结果显示mi R-34-5p可以显著增强Toll通路中负向调控基因CACT的表达并抑制编码抗菌肽防御素(Defensin)的免疫基因DEFD和呼吸链复合物Ⅲ亚基(Cytcb1)基因的表达;mi R-980-5p可以显著增强免疫Toll通路关键正向调控基因REL1A和呼吸链复合物Ⅴβ亚基(ATP合酶β亚基)基因的表达。为了探索Wolbachia对埃及伊蚊的免疫通路及呼吸链的影响作用,本研究通过高效液相色谱和荧光成像分析比较了W-Aag2细胞和Aag2细胞中线粒体数量以及能量代谢产物ATP、ADP和AMP的含量差异。结果显示W-Aag2细胞相比于Aag2细胞,线粒体数量及ATP、ADP的含量均发生了显著增高,Wolbachia可显著增强埃及伊蚊细胞的能量代谢。此外,通过荧光定量PCR比较了Wolbachia对宿主免疫通路调控基因的表达量影响,发现Wolbachia感染显著上调了Toll通路中多个免疫基因的表达。本研究探明了Wolbachia感染可以显著调控埃及伊蚊细胞内mi RNA表达谱并且增强埃及伊蚊细胞的能量代谢水平,同时验证了Wolbachia通过调控mi R-34-5p和mi R-980-5p激活了埃及伊蚊细胞的免疫Toll通路并提高其下游防御素的表达,同时增强细胞的能量代谢。根据文献报道免疫Toll通路在埃及伊蚊抵御登革病毒感染中发挥重要作用,提示本研究为阐明Wolbachia调控宿主抗病毒特性提供了新的分子靶标。可为科学使用基于Wolbachia的蚊媒控制技术预防控制蚊媒疾病提供理论基础。
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