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第一部分高龄妊娠对子代生长发育的影响目的:探讨高龄妊娠对子代一般生长发育的影响方法:将3月龄(n=10)与12月龄(n=10)的雌性SD大鼠分别与3月龄雄鼠随机合笼,以孕鼠每胎所生子鼠为研究对象,分别为适龄子代组(Ct1)和高龄子代组(AMA)。记录不同年龄孕鼠受孕时间、孕鼠每胎的产子数量、子鼠性别比例、子鼠的死亡数目、子鼠体重、子鼠睁眼状态,并观察子鼠有无发育畸形的情况。结果:(1)与适龄孕鼠相比,高龄孕鼠受孕时间明显延长(30.63±1.558天vs 23.80±0.6464天,t=4.370,P=0.0005);(2)高龄孕鼠与适龄孕鼠相比,每胎产子数量分别为11.55±0.9664只和11.55±1.337只(t=0,P=1),两组间差异无统计学意义;(3)AMA组雄性子鼠的数量较Ctl组有增多(5.909±0.8029只vs 4.636±0.7419只,t=1.164,P=0.2580),但差异无统计学意义;(4)AMA组子鼠死亡数量较 Ctl 组有增加(0.5455±0.3659 只 vs 0.3636±0.1521 只,t=0.4588,P=0.6513),但两组间差异无统计学意义;(5)在生后第4、5、6、7、14天,AMA组的体重明显高于Ctl组(t值在3.446-6.553,P值均小于0.001);(6)与Ctl组相比,AMA组睁眼状况延迟,在生后第14-15天最明显(睁眼状态评分分别为1.118±0.2369 分 vs 1.788±0.06908 分,t=3.601,P=0.0007;1.147±0.2339分 vs 1.988±0.0125 分,t=5.535,P<0.0001)。(7)2 只高龄子代鼠出现发育畸形,分别为肢体缺如、脑发育畸形。结论:除前期发现高龄妊娠影响子代的神经精神发育以外,高龄妊娠还导致雌鼠受孕时间明显延长,影响子鼠一般生长发育情况,包括生后早期子鼠体重增加,睁眼状况延迟。同时,可能出现子鼠发育畸形、死亡增加的风险。第二部分高龄妊娠对子代海马神经干细胞发育的影响目的:在前期发现高龄妊娠影响子代鼠神经精神发育的基础上,探讨高龄妊娠对子鼠海马神经干细胞增殖、迁移、分化的影响。方法:将3月龄(n=10)与12月龄(n=10)的雌性SD大鼠分别与3月龄雄鼠(n=20)合笼,以其子鼠为研究对象,分别为适龄子代组(Ctl)和高龄子代组(AMA)。两组均随机选取40只子代大鼠,分别在生后第7、14、28天分批处死动物,采集海马组织标本。用免疫荧光、Western Blot方法定位及定量检测海马Dcx、Nestin、PSA-NCAM、NeuN、GFAP蛋白表达水平,研究高龄妊娠子代神经干细胞增殖、迁移、分化的变化。结果:(1)Western Blot发现生后7天AMA组海马Dcx蛋白的表达明显低于Ctl 组(0.79±0.09 vs 1.32±0.19,t=2.457,P=0.0276);免疫荧光显示,AMA 组海马 DG 区 Dcx 的表达明显低于Ctl 组(31.52±1.36 vs 37.74 ±0.91,t=3.806,P=0.0019),而在海马CA1区、CA3区的表达在两组间均无统计学差异(分别为 33.99±0.64 vs 35.01±0.54,t=1.219,P=0.2429;38.22±1.45 vs 38.35±1.84,t=0.05684,P=0.9555)。(2)Western Blot 检测两组子鼠生后 7 天海马Nestin蛋白的表达,高龄组子鼠海马Nestin的表达有减少(0.70±0.09 vs 0.87±0.15,t=0.9672,P=0.3498),但差异无统计学意义;而免疫荧光发现,在海马DG区AMA组Nestin的表达明显低于Ctl组(25.67±2.46 vs 34.89 ±2.59,t=2.581,P=0.0218)。(3)免疫荧光发现生后 14 天 AMA 组 DG 区 PSA-NCAM 的表达明显低于 Ctl 组(26.36±1.31vs 33.42±1.52,t=3.523,P=0.0034),而在CA1区和CA3区表达的差异均无统计学意义(分别为37.26±1.36 vs 35.57±1.39,t=0.8688,P=0.3996;35.82±1.99 vs 35.34±2.73,t=0.1424,P=0.8888)。(4)Western Blot检测生后28天AMA组海马GFAP的表达有减少(1.03±0.14 vs 1.34±0.22,t=1.166,P=0.2631),但两组间差异无统计学意义,进一步通过免疫荧光发现AMA组GFAP的表达在CA1区、CA3区、DG区均低于Ctl组(24.27±0.98 vs 27.71±0.85,t=2.643,P=0.0193;26.14±1.14vs29.5±0.79,t=2.446,P=0.0282;25.21±0.87 vs 28.82±0.84,t=2.985,P=0.0098);而 NeuN 的表达,通过 Western Blot检测发现,AMA组海马NeuN的表达有所增加(1.31±0.21vs0.99±0.16,t=1.247,P=0.2329),但两组间差异无明显统计学差异,进一步通过免疫荧光发现AMA 组海马 CA1 区 NeuN 的表达增加(35.69±1.21 vs 15.03±1.17,t=12.27,P<0.001),但在CA3区和DG区Neu两组间NeuN的表达无明显统计学差异(分别为23.07±1.19vs23.64±2.47,t=0.2044,P=0.8410;31.40±1.73vs30.48±1.06,t=0.4546,P=0.6564)。结论:高龄妊娠可能通过抑制子鼠海马神经干细胞的增殖存活、迁移,并影响其向神经元和星形胶质细胞的分化,导致子鼠海马神经细胞发育障碍。