云南红豆杉内生真菌的分离、紫杉烷类化合物产生菌的筛选及其产物的研究

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为了从内生真菌发酵产物中获得具有抗肿瘤和抗病原微生物作用的化合物,本研究从植物云南红豆杉(Taxus yunnanensis)树皮中分离、纯化得到内生真菌200余株。对分离得到的内生真菌进行筛选,方法是将每株已纯化的内生真菌进行液体培养,然后将培养产物提取物与Taxol和BaccatinⅢ标准品利用TLC和HPLC进行对照,从而发现其中能够代谢产生紫杉烷类化合物的内生真菌。通过大量的筛选实验,结果发现3株内生真菌可能具有产紫杉烷类化合物的能力,其中为菌株12.3.2的液体培养提取物中含有与Taxol相同或相类似的化合物,菌株12.4.3、H⑥1.1的液体培养提取物中含有与巴卡亭Ⅲ相同或者相类似的化合物。将筛选得到的3株内生真菌作为目标菌株,首先研究了3株菌株的生物学特性,即真菌的显微结构、发酵特征等。形态学鉴别显示,菌株12.3.2、H⑥1.1属于青霉属(Penicillium.),菌株12.4.3属于曲霉属(Aspergillus.)。为了进一步发掘目标菌株的潜在生物活性能力,同时也为新药开发积累菌种资源,进一步以人类病原菌为指示菌,研究了3个目标菌株的抑菌活性。抑菌实验表明3株目标菌株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、白色链球菌和绿脓杆菌这5种致病菌都具有一定的抑制作用,尤其是菌株12.3.2对上述5种致病菌都有很强的抑制作用。结合菌株12.3.2能产紫杉烷类化合物,同时具有强烈的生物抑菌能力,选择该菌株进行发酵,通过一定规模的放大培养,从其发酵物中提取分离出主要成分,并对分离纯化的各成分进行结构鉴定和生物活性检测。利用硅胶柱层析的方法,从5 L BMAPh培养基发酵液中,分离出了3个主要成分,经过MS、IR、NMR等多种光谱解析,最终鉴定分别为邻苯二甲酸二异辛酯、油酸乙酯、松柏烯。通过生物抑菌实验发现,松柏烯是有较强抑菌活性的化合物。
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