TAF41(转录相关辅助因子47)是一种核蛋白,已被证实与RNA转录聚合酶I以及DNA聚合酶β的功能均有关系。有实验证据表明TAF41在人的某些恶性肿瘤细胞中,特别是卵巢癌细胞中高表达,而在正常组织细胞中检测不到。所以推测TAF41可能在肿瘤的发生过程中具有特定功能。对于TAF41的功能以及在肿瘤发生过程中的作用机理还不完全清楚。SUMO(小泛素类似修饰物)是近年来发现的一种蛋白质翻译后修饰物。它与泛素在二级结构及修饰过程上都极其相似,但是与泛素化介导的蛋白底物降解途径不同,SUMO化修饰发挥着更为广泛的功能,如转录活性调控,核质运输、细胞周期调节、细胞凋亡和DNA损伤修复等。SUMO通过对底物蛋白赖氨酸残基的共价修饰来实现对底物蛋白的调控。通过对TAF41氨基酸序列的分析,我们发现它含有两个潜在的SUMO化修饰位点,分别为其上的42位赖氨酸残基和168位赖氨酸残基。表明TAF41可能是一种新的SUMO化修饰底物,但是还没有任何关于它是如何被SUMO修饰以及SUMO修饰如何调节其转录通路的报道。在本研究中,我们首先构建了TAF41的真核表达载体pCMV-HA/Myc-TAF41,再以该载体为模板利用定点突变技术使野生型TAF41的第42位赖氨酸、第168位赖氨酸以及两个位点分别突变为精氨酸。酶切和测序鉴定结果表明重组质粒构建正确,并且所有的突变体都在特定位点上正确点突变。为了检测TAF41和SUMO-1的蛋白质相互作用,脂质体法将SUMO-1和TAF41及其突变体分别共转染到293细胞中。待蛋白表达后,免疫荧光法观测TAF41蛋白在细胞内的分布以及TAF41与SUMO-1的共定位情况。再进一步通过免疫共沉淀将在细胞内与TAF41结合的蛋白沉降出来,利用免疫印迹法检测TAF41是否与SUMO-1相互作用以及确定发生SUMO化修饰的位点。免疫荧光和免疫共沉淀结果证实TAF41是一种SUMO化修饰底物,并且其SUMO化位点确认为168位赖氨酸残基。暗示SUMO化修饰对于调节TAF41转录功能具有重要意义,并且这种调节极有可能是p53通路依赖型调节。