目的：本研究基于“天癸学说”理论，以雷公藤多甙致卵巢功能损伤建立大鼠模型来研究天癸失序的差异性，构建天癸失序药源性卵巢功能损伤大鼠模型，以期验证中医妇科“天癸学说”的科学性、合理性。运用减味寿胎丸对天癸失序药源性卵巢功能损伤大鼠模型进行干预，探索补肾复方对卵巢功能损伤的修复差异性及机理；同时通过对前、后期干预时机的对比研究，探索最佳用药时机，以期指导于临床治疗。　　方法与结果：　　1．药源性卵巢功能损伤大鼠模型的建立　　方法：将6月龄SD雌性大鼠30只，随机分为正常对照组、雷公藤多甙50mg/kg组和75mg/kg组，每组10只。两雷公藤多甙组分别灌服对应浓度的雷公藤水溶液，1ml/100g.d，正常对照组灌服同等剂量生理盐水；连续30天，30天后1-5天选择非动情期取材。　　结果:　　（1）一般情况：三组比较，雷公藤多甙50mg/kg组和75mg/kg组均有出现肾虚症状，如毛松、无光泽、稀便等，其中，75mg/kg组症状更为显著。　　（2）体重：与正常对照组的平稳增长比较，雷公藤多甙50mg/kg组和75mg/kg组均可致体重减轻，两组组间比较无显著性差异。　　（3）动情周期：正常对照组动情周期规律，雷公藤多甙50mg/kg组D11-D20即有半数大鼠出现动情周期的延长、紊乱，而75mg/kg组几乎全部大鼠出现动情周期的延长、紊乱，差异有显著性；D21-D30则雷公藤多甙50mg/kg组和75mg/kg组全部大鼠均出现动情周期的延长、紊乱。　　（4）血清内分泌激素水平的比较：雷公藤多甙50mg/kg组大鼠造模后FSH显著升高；E2略低但无显著性差异；雷公藤多甙75mg/kg组大鼠FSH显著升高、E2显著降低；且两组比较无显著性差异。各组FSH/LH比值两两比较均无显著性差异，但有升高的趋势：雷公藤多甙75mg/kg组＞50mg/kg组＞正常对照组。各组LH水平两两比较均无显著性差异。　　（5）血清细胞因子INHB、AMH变化的比较：雷公藤多甙50mg/kg组大鼠造模后AMH显著降低；INBH略低，但无显著性差异；雷公藤多甙75mg/kg组大鼠INHB、AMH均显著降低，其中，雷公藤多甙50mg/kg组INHB水平显著高于75mg/kg组。　　（6）单侧卵巢指数、子宫指数的变化：雷公藤多甙75mg/kg组造模后卵巢指数显著下降，50mg/kg组无显著性差异；三组子宫指数的比较均无显著性差异。　　（7）大鼠卵泡计数的比较：雷公藤多甙50mg/kg组和75mg/kg组造模后均见生长卵泡、成熟卵泡/卵泡总数明显减少，但75mg/kg组更甚；三组黄体数比较无显著性差异。　　（8）卵巢组织形态学变化：雷公藤多甙50mg/kg组和75mg/kg组造模后均有不同程度的卵巢萎缩，生长卵泡减少，间质纤维化，颗粒细胞层数减少，其中，75mg/kg组更甚。　　（9）卵巢GnRH-R的蛋白表达：GnRHR蛋白主要表达于排卵前卵泡的颗粒细胞，也可见于卵巢表面上皮细胞和黄体细胞，在次级卵泡和小窦卵泡的颗粒细胞表达较弱或缺失，原始卵泡则未见表达。雷公藤多甙50mg/kg组和75mg/kg组颗粒细胞 GnRHR蛋白表达显著低于正常对照组。　　（10）卵巢组织GnRHR-mRNA的表达：雷公藤多甙50mg/kg组和75mg/kg组造模后表达量均降低，两组组间比较，75mg/kg组更甚。　　2．天癸失序药源性卵巢功能损伤大鼠模型差异性研究　　方法：分别将3月龄、6月龄、11-12月龄各30只，共90只。随机分成：正常对照组、雷公藤组、自然修复组，每组各10只。三个月龄段大鼠正常对照组灌服同等剂量生理盐水，雷公藤组灌服雷公藤多甙75mg/kg，均连续30天，日一次。造模30天后选择1-5天非动情期取材。　　自然修复组予雷公藤多甙75mg/kg，每日一次，连续30天，30天造模结束后，取出一侧卵巢、并眼眶取血，然后停药、连续观察30天，再选择1-5天非动情期取材。　　结果：天癸失序药源性卵巢功能损伤大鼠模型的自身卵巢、内分泌激素水平的前后对比：停药后，大鼠仍有不同程度的肾虚表现，如毛松，体重增长缓慢，动情周期未能恢复；3月龄及6月龄D60 E2水平较D30明显降低，6月龄FSH/LH亦明显升高，3月龄大鼠生长卵泡明显减少，其他自身卵巢、内分泌激素水平指标自身前后比较未见明显变化。　　天癸失序药源性卵巢功能损伤大鼠模型差异性研究：　　（1）一般情况：三个月龄段大鼠造模后均出现不同程度的肾虚表现。　　（2）体重：三个月龄段大鼠造模后体重显著减轻。　　（3）动情周期：三个月龄段大鼠造模后均出现动情周期的延长、紊乱；11-12月龄在D1-D10就有半数大鼠出现动情周期的紊乱、延长，比前两个月龄段大鼠显著提前（D11-D20），差异有显著性。　　（4）血清内分泌激素水平的比较：造模后，3月龄和6月龄组FSH显著上升、E2显著下降，均有显著性差异；3月龄大鼠造模后FSH/LH略升高，6月龄明显升高。11-12月龄空白组大鼠较前两个年龄段空白组大鼠的E2水平低，FSH、FSH/LH水平高，与3月龄及6月龄大鼠造模后水平相仿，造模后的激素变化亦不及3月龄和6月龄组显著。各组造模后LH、FSH/LH无显著性差异。　　（5）血清细胞因子的比较：三个月龄段大鼠造模后均可导致INHB、AMH水平显著的下降，其中，3月龄、6月龄AMH水平下降程度相仿；而INHB水平下降则6月龄较3月龄更显著；11-12月龄大鼠空白组AMH、INHB水平较3月龄、6月龄空白组均低，与3月龄、6月龄大鼠造模后水平相仿，11-12月龄大鼠造模后，AMH、INHB水平略下降。　　（6）卵巢指数、子宫指数的变化：三个月龄段大鼠造模后均可显著导致卵巢指数的降低。其中，3月龄、6月龄模型组大鼠造模后卵巢指数下降程度相仿；11-12月龄空白组卵巢指数显著低于3月龄及6月龄大鼠空白组，与造模后无明显差异。造模后各组子宫指数略下降，无显著性差异。　　（7）卵泡计数的比较：3月龄大鼠生长卵泡、成熟卵泡/卵泡总数略减少，6月龄则明显减少；11-12月龄大鼠空白组较前两者空白组低，造模后未见明显差异；各组黄体数未见显著性差异。　　（8）卵巢组织形态学的变化：11-12月龄大鼠空白组比3月龄、6月龄大鼠空白组生长卵泡少，颗粒细胞层数减少；三个月龄段大鼠造模后均有不同程度的卵巢萎缩，生长卵泡减少，间质纤维化，颗粒细胞层数减少，其中，11-12月龄组大鼠最甚。　　（9）免疫组化法检测卵巢GnRH-R蛋白表达：3月龄及6月龄大鼠造模后颗粒细胞 GnRHR蛋白表达显著低于各自的正常对照组。11-12月龄正常对照组较前两个月龄段大鼠表达稍少，造模后表达量显著减少。　　（10）卵巢组织GnRHR-mRNA的表达：三个月龄段大鼠造模后GnRHR-mRNA在卵巢的表达量均显著下降。　　3．减味寿胎丸对天癸失序药源性卵巢功能损伤大鼠干预机理及时机的探讨　　方法：分别将3月龄、6月龄、11-12月龄各90只，共270只。随机分成：正常对照组、前期干预模型组、前期干预西药组、前期干预减味寿胎丸高、低剂量组，后期干预模型组、后期干预西药组、后期干预减味寿胎丸高、低剂量组。每组各10只。　　三个月龄段大鼠正常对照组灌服3ml生理盐水，连续30天；前期干预模型组灌服雷公藤多甙，连续30天；后期干预模型组在连续灌服雷公藤多甙30天后，改予3ml生理盐水，连续30天，均为每日1次；前期干预治疗组上午9时灌服雷公藤多甙，下午3时灌服减味寿胎丸或戊酸雌二醇；后期干预治疗组在连续灌服雷公藤多甙30天后，改予减味寿胎丸或戊酸雌二醇。造模结束24小时后，选择1-5天非动情期处死、取材。　　结果：　　（1）一般情况：三个月龄段大鼠经减味寿胎丸前、后期干预后，行为学均有不同程度的改善，如脱毛显著减少，光泽度稍增高，灵活、反应度尚可等。　　（2）体重：三个月龄段大鼠前期干预治疗组体重均有所减轻；后期干预各治疗组有所增加，其中，中药组优于西药组。　　（3）动情周期的变化：3月龄及6月龄各干预治疗组均可使部分大鼠恢复动情周期，但与模型组比较；11-12月龄大鼠动情周期见少部分恢复。　　（4）血清内分泌激素水平的变化：3月龄大鼠前期干预各治疗组E2水平显著升高、FSH水平、FSH/LH比值显著降低；6月龄大鼠前期干预各治疗组FSH水平显著下降，而E2、FSH/LH无变化；后期干预各治疗组则E2显著升高、FSH水平、FSH/LH比值显著降低。11-12月龄大鼠前、后期干预各治疗组E2略升高、FSH、FSH/LH水平略降低，与模型组比较。各组LH比较均无明显差异。　　（5）血清细胞因子的比较：3月龄大鼠减味寿胎丸前期干预低剂量组AMH、INHB水平明显升高，而高剂量组及西药组未见显著变化。后期干预各组未见明显变化；6月龄大鼠前期干预各治疗组INHB、AMH水平略升高；后期干预减味寿胎丸高剂量组INHB水平明显升高，低剂量组及西药组未见显著性变化，后期干预各治疗组AMH水平均明显升高。11-12月龄大鼠前、后期干预减味寿胎丸低剂量组AMH水平均显著升高（P＜0.05），高剂量组及西药组略升高，但统计学上无显著性差异。　　（6）单侧卵巢指数、子宫指数的变化：3月龄大鼠前期干预减味寿胎丸低剂量组卵巢指数显著升高，高剂量及西药组略升高，但统计学上无显著性差异。后期干预各治疗组卵巢指数均显著升高，组间比较无显著性差异；6月龄及11-12月龄大鼠前、后期干预各治疗组卵巢指数均略升高，但统计学上均无显著性差异；三个月龄段前、后期干预各治疗组子宫指数均未见明显差异。　　（7）大鼠卵泡计数的比较：3月龄大鼠前、后期干预各治疗组生长卵泡、成熟卵泡/卵泡总数、均略增加；6月龄大鼠前、后期干预各治疗组生长卵泡、成熟卵泡/卵泡总数均显著增加；11-12月龄大鼠前、后期干预各治疗组生长卵泡、成熟卵泡/卵泡总数均略增加。三个月龄段大鼠前、后期干预各治疗组黄体数均无显著性差异。　　（8）卵巢组织形态学的变化：与三个月龄段前、后期干预模型组大鼠比较，三个月龄段大鼠干预治疗组均有不同程度组织形态的修复：生长卵泡增多、颗粒细胞层数增加、间质纤维化改善等。　　（9）免疫组化法检测卵巢GnRH-R的蛋白表达：3月龄及6月龄大鼠造模后颗粒细胞 GnRHR蛋白表达显著低于各自的正常对照组。11-12月龄正常对照组较前两个月龄段大鼠表达稍少，造模后表达量明显减少。各月龄段后期干预模型组在停药30天后亦未见GnRH-R的蛋白表达增多。减味寿胎丸高、低剂量与西药前、后干预各表达量均较模型组增多。　　（10）卵巢组织GnRHR-mRNA的表达：3月龄大鼠前期干预西药组GnRHR-mRNA的表达量显著增多；减味寿胎丸低剂量组表达量略增加，但无显著性差异。后期干预各治疗组表达量均略增加，但均无显著性差异。　　6月龄大鼠前期干预西药组和减味寿胎丸高剂量组卵巢GnRHR-mRNA表达量显著增加，低剂量组略增加，但无显著性差异。后期干预各治疗组表达量亦略增加，但无统计学意义。　　11-12月龄大鼠前、后期干预模型组造模后表达量较空白组略下降，但无统计学意义。而前期干预西药组表达量显著升高，减味寿胎丸高、低剂量组表达量略升高，但无显著性差异。后期干预各治疗组表达量亦略升高，但无显著性意义。　　结论：　　1.成功建立了药源性卵巢功能损伤大鼠模型（75mg/kg.30d），并通过减味寿胎丸有效干预，以方测证，明确了其中医属性为肾虚型。　　2.雷公藤对卵巢功能损伤的作用机制可能是通过卵泡损伤（颗粒细胞的损伤），间质纤维化，影响卵巢血液供应，以及减少卵巢GNRHR-mRNA的表达，致卵巢皮质损伤、卵巢萎缩，生长卵泡减少，分泌雌激素水平下降，负反馈性的引起下丘脑-垂体分泌卵泡刺激素增多，终致“H-P-O”轴功能失调、低下。　　3.通过不同年龄段大鼠模型的比较，明确天癸失序药源性卵巢功能损伤大鼠模型的差异性：3月龄及6月龄大鼠卵巢功能损伤程度大致相仿，且有进一步加重的趋势，而11-12月龄初老大鼠在生理上接近卵巢功能衰退期，造模后，卵巢储备功能明显下降。从而在一定程度上验证了中医妇科“天癸学说”理论的科学性、合理性。　　4．减味寿胎丸可拮抗、修复雷公藤致卵巢功能损伤，且干预时机与大鼠月龄相关。3月龄为前期干预有显效，6月龄为后期干预有显效，11-12月龄前、后期干预卵巢功能均可修复，但无显效。可能是减味寿胎丸提高卵巢对促性腺激素的反应性和调节卵巢内分泌激素的水平，提高受体的表达，改善卵巢血液供应及组织形态，使得生长卵泡数量增加，卵巢储备功能提高，进而调整H-P-O轴，改善卵巢功能。　　5.卵巢功能损伤的微环境：GnRHR主要表达部位排卵前卵泡的颗粒细胞。说明GnRH存在自分泌生理调控机制，可直接作用于卵巢，影响颗粒细胞激素的分泌。