目的:明确低浓度索拉非尼（sorafenib）与RSL3联合用药增强肝癌细胞的杀伤作用。探究sorafenib、RSL3二者联合用药与gasdermin（GSDME）介导焦亡作用的关系。阐明sorafenib、RSL3二者联合用药通过GSDME介导细胞焦亡进而增强肝癌对药物的敏感性,为临床逆转肝癌耐药提供新的治疗思路及实验依据。方法:一、探索不同浓度sorafenib、RSL3及二者联合用药对肝癌细胞杀伤作用的影响1、显微镜下观察sorafenib、RSL3、以及二者联合用药对肝癌细胞的形态影响。2、Cell Counting Kit-8（CCK8）检测不同浓度的sorafenib、RSL3及二者联合用药对多种肝癌细胞增殖的影响。3、Western-blot（WB）实验检测sorafenib、RSL3、以及二者联合用药对肝癌细胞中caspase-3、GSDME、GPX4等蛋白水平影响。二、细胞水平探讨GSDME表达水平对sorafenib与RSL3联合用药诱导细胞焦亡的影响。1、构建重组慢病毒GSDME–sh RNA沉默细胞株,Western-blot法检测GSDME低表达对细胞焦亡相关蛋白表达的影响。2、构建重组慢病毒caspase-3-sh RNA沉默细胞株,Western-blot法检测caspase 3低表达对细胞焦亡相关蛋白表达的影响。三、动物实验探讨GSDME介导的焦亡对增强sorafenib与RSL3联合用药抗癌作用的影响。1、在BALB/c裸鼠体内分别构建人源性SK-Hep1细胞移植瘤模型。研究联合用药在裸鼠体内对人肝癌细胞的杀伤作用影响。2、在BALB/c裸鼠体内分别构建鼠源性Hep1-6细胞移植瘤模型。研究联合用药在裸鼠体内对小鼠肝癌细胞的杀伤作用影响。3、在C57BL/6小鼠构建鼠源性Hep1-6细胞移植瘤模型。研究联合用药在小鼠体内对小鼠肝癌细胞的杀伤作用影响。免疫组化检测肿瘤组织内CD3+T细胞、CD49b+NK细胞、CD11C+树突状细胞和F4/80+巨噬细胞的浸润情况。结果:一、低剂量的Sorafenib与RSL3联合用药,明显增强了肝癌细胞的杀伤作用。1、较大剂量的sorafenib才能杀伤肝癌细胞。我们使用30μmol/L浓度的sorafenib显示对SK-Hep1、97L、Hep G2肝癌细胞有杀伤作用（psorafenib（30 mg/kg）组>未用药组。三个用药组之间对肿瘤的抑制情况无统计学差异,三个用药组分别与未用药组之间存在统计学差异。2、在裸鼠Hep1-6肿瘤移植模型中实验结果表明,联合用药后肿瘤依旧生长,只是肿瘤生长和未用药相比相对缓慢,其中抑制效果:solafeinib（15 mg/kg）+RSL3（1.5 mg/kg）组>solafeinib（7.5 mg/kg）+RSL3（1.5 mg/kg）组>sorafenib（30 mg/kg）组>未用药组。联合用药组分别与未用药组之间存在统计学差异,单独用药组与未用药组无统计学差异。五、联合用药明显诱导C57BL/6小鼠肿瘤组织中的免疫细胞浸润。1、在C57BL/6小鼠Hep1-6肿瘤移植模型中,联合用药组对肿瘤生长有明显的抑制作用。抑制效果sorafenib（15 mg/kg）+RSL3（1.5 mg/kg）组>sorafenib（7.5 mg/kg）+RSL3（1.5 mg/kg）组>sorafenib（30 mg/kg）组>未用药组。根据统计分析,三个用药组之间对肿瘤的抑制情况无统计学差异,三个用药组分别与未用药组之间存在统计学差异。联合用药后肿瘤生长明显的被抑制,并且有消退的趋势。2、联合用药可能通过细胞焦亡诱导免疫细胞发挥抗肿瘤作用。通过药物在免疫缺陷裸鼠和免疫正常小鼠移植瘤模型中抗肿瘤作用实验结果分析,发现在C57BL/6小鼠中用药组对肿瘤的抑制更加明显,可能与C57BL/6小鼠存在有免疫力相关,我们进一步用流式细胞检测发现联合用药组的肿瘤组织内CD3+T细胞、CD49b+NK细胞、CD11C+树突状细胞和F4/80+巨噬细胞的浸润显著增加,提示药物会促进免疫细胞浸润肿瘤进而杀伤肿瘤。结论:与大剂量的sorafenib、RSL3才能杀伤肝癌细胞相比,低浓度的sorafenib与RSL3联合用药即明显发挥出对肝癌细胞的杀伤作用,并且细胞形态以焦亡为主,焦亡执行蛋白GSDME-N水平增加,但与caspase-3表达水平关系不明显。体内联合用药增强了sorafenib抗肝癌作用的敏感性。可能通过GSDME介导细胞焦亡,释放因子诱导肿瘤免疫细胞浸润有关。