不同贮藏温度对红皮香蕉花青素合成影响及红皮香蕉MaANS基因功能研究

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香蕉的贮藏温度。2.红皮香蕉Ma ANS基因克隆及亚细胞定位分析利用RT-PCR技术成功克隆出Ma ANS基因的全长序列,Ma ANS基因CDS区1083 bp,编码360个氨基酸,为亲水性不稳定蛋白;具有ANS蛋白的20G-FeⅡ_Oxy高度保守结构域;启动子顺式元件中存在光响应元件、脱落酸响应元件、MYB结合位点响应元件等;Ma ANS蛋白和芭蕉亲缘关系最近,且与单子叶植物也聚为一支;亚细胞定位Ma ANS于细胞质中,预示着其可能影响花青素合成的同时,又可以维持细胞结构稳定。3.红皮香蕉Ma ANS基因在拟南芥上的过表达验证构建p SAK277-Ma ANS植物过表达载体,通过花序侵染法进行拟南芥的遗传转化。结果显示:转基因拟南芥茎秆呈现淡粉色,叶面、叶背基部均呈现出紫色;转基因植株叶和茎的花青素含量均高于野生型拟南芥,其中叶片高出约3.24倍,茎高出对照3.13倍,而花在野生型与转基因植株中差异不显著;Ma ANS基因在转基因拟南芥的茎、叶片中表达量极高,是野生型拟南芥的400多倍。4.Ma ANS基因PTG-Cas9沉默载体的构建及其在红皮香蕉上的稳定转化使用改良后的CRISPR/Cas9系统构建载体,构建包含靶基因的sg RNA表达盒,用“金门克隆”的方法将表达盒边切边连至表达载体上,构建出PTG-Cas9-Ma ANS植物沉默载体,并以红皮香蕉吸芽横切薄片为受体,采用农杆菌介导法进行红皮香蕉的遗传转化。获得的抗性植株为白化表型芽苗、非完全白化芽苗。利用基因组特异性引物靶位点突变进一步测序分析,靶位点处发生了碱基的缺失与替换,从而导致了翻译错误,丧失其原有功能。
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